【摘 要】
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该论文即采用Bsc-to-Bac系统来代替该实验室原先采用的共转染获取重组病毒的方法,在培养昆虫细胞中表达了人生长激素.首先通过亚克隆操作构建了含有人生长激素基因(hGH cDNA)
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该论文即采用Bsc-to-Bac系统来代替该实验室原先采用的共转染获取重组病毒的方法,在培养昆虫细胞中表达了人生长激素.首先通过亚克隆操作构建了含有人生长激素基因(hGH cDNA)的重组转移载体pEastBac-hGH,转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac后发生转座,得到含hGH cDNA的重组穿梭载体rBacmid-hGH.将其转染进入昆虫细胞得到重组病毒rAcV-Bac-hGH.在感染贴壁及悬浮培养的昆虫细胞后实现了人生长激素的表达,其中贴壁培养的表达量用ELISA检测为70mg/L培养液.论文还探讨了hGH cDNA5非转译序列对表达影响的研究究方法.采用PCR的方法在hGH cDNA的5非转译区引入酶切位点,通过酶切反应实现上游序列的去除,并将缩短后的hGH cDNA序列引入Bsc-to-Bac系统中,得到了重组穿梭载体rBacmid-hGH664.缩短hGH cDNA序列对昆虫细胞中表达人生长激素的影响仍需要进行深入的研究.
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