本文将含有canstatin-N基因的质粒pPIC9K-CN线性化后，电激法转化毕赤酵母GS115,获得his+阳性转化子，将阳性转化子点种到具不同G418浓度(1000，2000，3000 ug/mL)的YPD平板上，并用线性化诱导型质粒pPIC9K-CN再次转化在含3000 ug/mL G418的YPD平板上挑选的抗性菌株，在含4000 ug/mLG418的YPD平板上挑选出高G418抗性转化子。PCR结果表明canstatin-N基因已整合到毕赤酵母GS115(pPIC9K-CN)染色体上。对转化子进行诱导表达，Tricine SDS-PAGE电泳显示，GS115(pPIC9K-CN)经甲醇诱导后在10 kDa附近出现一条新的蛋白带，而转化了pPIC9K空载体的GS115的泳道上没有这条蛋白带，表明canstatin-N基因可能已在毕赤酵母转化子中获得诱导型表达。采用摇瓶发酵方法，对GS115(pPIC9K-CN)的表达条件，即起始甲醇浓度及发酵时间进行了研究，确定了最适起始甲醇浓度为3％，30℃诱导72 h后，表达量约为25 mg/L。将表达上清经过超滤浓缩除盐后，采用StreamLine SP阳离子交换柱进行纯化，上柱条件为：pH 5.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液体系作为上样缓冲液，以0.15mol/L的NaCl溶液为洗脱液。最后，分别用CAM法和MTT法检测纯化产物的生物活性。在CAM试验中，cantatin-N抑制鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管的形成，其作用呈剂量依赖性。 本文还构建了组成型表达质粒pGAP9K-CN，将其线性化后电激法转化毕赤酵母GS115,获得his+阳性转化子，经G418抗性筛选，在含3000 ug/mL G418的YPD平板上挑选出高G418抗性转化子用于摇瓶发酵。