论文部分内容阅读
P选择素(CD62P、PADGEM、GMP140)是细胞粘附分子选择素家族成员，主要参与介导白细胞与内皮细胞的起始粘附，与免疫损伤、炎症反应、血栓形成、淋巴细胞再循环等有密切联系。 本研究从人血小板中提取总RNA，经RT-PCR得到P-选择素cDNA基因，用PCR方法扩增其中的Lectin-EGF片段，并将其克隆到原核表达载体PBV220中，通过酶切，PCR和基因序列分析确定重组入载体的片段为目的基因的核苷酸序列。再将其转化宿主菌DH5α，以包涵体形式表达人P-选择素胞外区Lectin-EGF片段蛋白，蛋白经变性、复性后分别配置成40ng／ml、30ng／ml、20ng／ml、10ng／ml的PBS溶液，包被于组织培养皿上，并对抗活化血小板表面受体全套单链抗体噬菌体展示文库进行四轮筛选，再以150ng每孔包被酶标板，筛选到3个阳性克隆，抽提其质粒进行PCR检测可扩增出780bp特异条带，与单链抗体基因预计值相符，pET20b(+)系统成功表达了筛选到的单链抗体，为今后进一步研究打下基础。