背景：　　 脓毒症尤其严重脓毒症仍是面临的主要健康问题之一，是重症监护病房(ICU)病人的首要死亡原因。内皮细胞激活、功能障碍和损伤是严重脓毒症及多器官功能障碍综合征(MODS)的重要特征。内皮通透性增高所致微血管渗漏是严重脓毒症和MODS的重要病理生理。最近发现，高迁移率族蛋白1(high mobility group box1，HMGB1)是一种晚期重要炎症因子，参与脓毒症病理过程。本实验拟研究晚期炎症因子高迁移率族蛋白1对内皮细胞单层通透性的影响及其作用机制。　　 方法：　　 (1)体外分离培养人原代脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVEC)，镜下观察HUVEC细胞形态特征，免疫组织化学方法检测HUYEC胞浆Ⅷ因子的表达。　　 (2)用200 ng/ml的高迁移率族蛋白1于不同时间点(6 h，12 h，24 h和48 h)刺激HUVEC以及不同剂量(50ng/ml，100 ng/ml，200 ng/ml和400 ng/ml)的高迁移率族蛋白1刺激HUVEC24h，采用Transwell chamber弥散模型，以荧光光谱仪测定异硫氰酸荧光素(FITC)标记的葡聚糖(Dextran)透过Transwell小室的荧光强度，通透性系数表示人血管内皮细胞单层的通透性大小；　　 (3)流式细胞术检测HMGB1刺激内皮细胞24h后内皮细胞的凋亡情况。HMGB1刺激融合生长的内皮细胞单层，荧光显微镜观察内皮细胞黏附连接蛋白(VE-cadherin)的形态分布以及蛋白免疫印迹法检测内皮细胞VE-cadherin总蛋白和膜蛋白的表达变化情况。　　 (4)分别用RT-PCR法和蛋白免疫印迹法检测HMGB1刺激内皮细胞前后TLR2，TLR4和RAGE的mRNA和蛋白表达变化，流式细胞术测定HMGB1刺激内皮细胞前后细胞膜表面Toll样受体2(Toll Like Receptor2，TLR2)，Toll样受体4(Toll LikeReceptor4，TLR4)和晚期糖基化终产物受体(Receptor for advanced glycation endproducts，RAGE)的变化情况。　　 (5)分别用TLR2，TLR4和RAGE特异性抗体和特异性siRNA抑制TLR2，TLR4和RAGE，再检测HMGB1刺激内皮细胞前后血管内皮细胞单层通透性的变化。　　 (6)分别用MAPK抑制剂(U0126；SB203580；SP600125)，蛋白激酶C抑制剂(Ro-31-8425)和Src络氨酸激酶抑制剂(PP2)抑制特异蛋白激酶活性，再检测血管内皮细胞单层通透性的变化。　　 结果：　　 (1)显微镜下人原代脐静脉内皮细胞呈椭圆形或梭形，铺路石状镶嵌排列，胞浆表达Ⅷ因子呈阳性，具有典型的内皮细胞特征；　　 (2)与对照组相比，HMGB1诱导内皮细胞单层通透性增高，且内皮细胞单层通透性随HMGB1剂量增大而增高。HMGB1作用24h后内皮细胞单层通透性升高达到最大，在48h后内皮细胞单层通透性又降低。　　 (3)相比较于对照组，HMGB1刺激内皮细胞24h后，内皮细胞凋亡没有增加。HMGB1刺激内皮细胞后，内皮细胞VE-cadherin排列紊乱模糊、失去连续性、片段化分布于细胞边界；上述损伤性变化在HMGB1作用24h最明显。蛋白免疫印迹法显示HMGB1刺激内皮细胞后内皮细胞膜上VE-cadherin蛋白减少，但是HMGB1刺激内皮细胞前后VE-cadherin蛋白总量并没有变化。　　 (4)HMGB1刺激内皮细胞6 h后TLR2和TLR4 mRNA水平没有变化，但是RAGEmRNA转录水平上升。HMGB1刺激内皮细胞12 h后，RAGE蛋白表达开始上升，至24h达到最高，在48 h后RAGE蛋白表达又下降。TLR2蛋白表达水平比较低，在HMGB1刺激内皮细胞后TLR2和TLR4蛋白表达没有上升。流式细胞术表明HMGB1刺激内皮细胞24 h后，TLR2、TLR4和RAGE在内皮细胞膜上含量都上升。　　 (5)TLR2，TLR4特异性抗体和siRNA不能抑制HMGB1诱导的内皮细胞层通透性升高，而RAGE特异性抗体和siRNA明显抑制了HMGB1诱导的内皮细胞层通透性升高。　　 (6)MAPK抑制剂(U0126，SB203580，SP600125)，蛋白激酶C抑制剂(Ro-31-8425)不能抑制HMGB1诱导的内皮细胞层通透性升高，Src酪氨酸激酶抑制剂(PP2)显著抑制HMGB1诱导的内皮细胞层通透性升高。　　 结论：　　 HMGB1通过诱导内皮细胞膜上VE-cadherin结构改变及位置变化，导致细胞间裂隙形成，引发内皮细胞层通透性增高，其机制之一是通过RAGE和Src酪氨酸激酶信号通路发生作用。