黑曲霉固态发酵茶梗制备的单宁酶转化茶叶儿茶素研究

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单宁酶(EC3.1.1.20)又称单宁酰基水解酶,它能够水解没食子单宁中的酯键和缩酚键,产生没食子酸和葡萄糖。单宁酶在食品、化妆品、皮革工业中具有广泛的应用。目前单宁酶的研究主要集中于菌种的选育及应用技术探索,而对于低成本的单宁酶发酵技术的研究尚不足。本研究对单宁酶产生菌株JMU-TS528进行鉴定,用茶叶梗固态发酵制备单宁酶,测定该单宁酶的酶学性质,研究其对乌龙茶和绿茶中儿茶素的转化作用。主要的实验结果如下:1)根据分子生物学鉴定和形态学观察结果,将单宁酶生产菌株JMU-TS528鉴定为Aspergillus niger;用茶梗为原料对黑曲霉JMU-TS528进行固态发酵,经过硫酸铵沉淀、离子交换层析和凝胶过滤层析等步骤制备获得单宁酶。2)该单宁酶的最适pH为5.5,最适温度为50°C,在pH3.0-7.0和4-60°C之间具有良好的稳定性; Al3+、EDTA、DTT对该单宁酶具有强烈的抑制作用,Fe2+、Fe3+、Ag+、SDS、Urea、Tween80和Triton X-100对该单宁酶具有激活作用;该单宁酶能水解没食子酸丙酯(PG)、表没食子儿茶素(ECG)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)、单宁酸(TA)和双没食子酸(DG)等底物,但其对单宁酸的亲和性最强,而对GCG的最大反应速度和催化速率均最大。3)该单宁酶可有效水解乌龙茶和绿茶水浸出物中酯型儿茶素(EGCG、ECG和GCG),生成非酯型儿茶素(EGC、EC和GC)和GA;其中,EGCG的转化速率高于ECG和GCG。经单宁酶处理后的乌龙茶水浸出物的DPPH·、ABTS·和OH·自由基清除率分别提高了14.5%、15.4%和44.5%,而经单宁酶处理后的绿茶水浸出物的DPPH·、ABTS·和OH·自由基清除率分别提高了24.5%、24.5%和61.7%。同时水浸出物的茶乳形成量减少,稳定性增强。本论文鉴定了一株产单宁酶的黑曲霉,以茶梗为原料固态发酵制备了单宁酶,确定了该单宁酶的酶学性质,明确了其对乌龙茶和绿茶的儿茶素具有良好的水解活性,可提高茶叶提取物的抗氧化活性及澄清度,为单宁酶的生产及应用提供了理论参考。
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