胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,研究导致胃癌发生发展和复发的关键因素及调控机制,提供诊断预后标记物和治疗胃癌的新靶点具有非常重要的意义。我们研究的基因mdp1(magnesium-dependentphosphatase1),是本实验室在扫描胃癌(Ⅲ 期)SDFS(Short disease-free survival)/LDFS(Long disease-free survival)的病例样本的DNA甲基化谱中,发现的具有高度差异性的基因。mdp1在SDFS样本中高度甲基化而在LDFS样本中甲基化不明显。实验室前期已经完成对DNA甲基化芯片结果的验证。我们利用免疫组化检测胃癌Ⅲ期患者在SDFS和LDFS病例组织样本各33例中Mdp1的表达,结果显示Mdp1在SDFS组病例中低表达,而在LDFS组病例中高表达,与芯片数据吻合。这提示我们在早期复发样本(SDFS)中Mdp1的DNA甲基化有可能发生在启动子区域而使其基因沉默,降低其蛋白表达。这也表明mdp1高甲基化可能是一个不良预后的信号。为了进一步探究Mdp1在胃癌发生发展中的作用,我们构建过表达和敲降Mdp1细胞系,研究Mdp1在胃癌中的功能和机制。细胞生长曲线和克隆形成实验表明,当过表达Mdp1时,能抑制胃癌细胞增殖;相反,当敲除Mdp1时,促进细胞增殖。通过β-Gal染色、TUNEL、流式细胞仪法等试验方法检测结果显示,过表达Mdp1能促进细胞衰老,加速细胞凋亡。而敲除Mdp1对胃癌细胞衰老凋亡影响不明显。结合流式细胞周期和免疫组化的结果(前期工作),我们推测,mdp1可能是一个抑癌基因,能够抑制细胞增殖,促进细胞衰老和凋亡。正常情况下Mdp1是高表达,在某些致癌因子的诱导下,导致DNA甲基化而沉默,进而促使胃癌发生发展和复发恶化。在此推测的基础上,我们对Mdp1蛋白在胃癌中作用机制进行了初步的研究。首先,体外磷酸酶检测结果显示,Mdp1蛋白是一种蛋白酪氨酸磷酸酶。我们用泛磷酸化酪氨酸抗体连接用Mdp1处理后PVDF膜,Western-blot结果显示,Mdp1能够去除大部分磷酸化酪氨酸蛋白中的磷酸基团。另外,我们检测了大部分影响增殖和凋亡的信号通路,发现Mdp1能够明显抑制JNK和Stat3的磷酸化,我们推测,Mdp1作为一种蛋白酪氨酸磷酸酶,在JNK和STAT3信号通路中发挥负反馈调节的作用。目前还没有明显的证据说明Mdp1是直接与p-JNK和p-STAT3结合发挥作用还是通过中间底物影响JNK和STAT3的磷酸化。