随着社会的进步，遗传性疾病的发病率逐年升高，并且绝大多数遗传病很难根治，多数遗传性疾病又与个体的发育直接或间接相关，所以阐明其发病机制对防治遗传性疾病有重要的指导意义和潜在的应用价值。本研究通过了解眼发育相关基因CRX(Cone-rod Homeobox)及SIX(Sine Oculis Homeobox Homolog)家族成员(SIX1,SIX3,SIX6)蛋白的特性，探索它们在遗传性眼疾发生发展中的作用，主要应用蛋白复合体免疫沉淀(protein complex pull-down)等分子生物学技术，寻找与CRX蛋白发生相互作用的蛋白分子，并了解眼发育相关基因SIX家族成员对发育分化的影响，为后续进一步分析这类遗传性疾病的致病机制奠定基础。　　 1.CRX蛋白复合物成员的分析　　 目的：分离纯化CRX蛋白复合体的其他蛋白成分，了解CRX蛋白参与的信号通路。方法：将CRX基因克隆到逆转录病毒载体pOZFHN-puro上，通过在293T细胞中的瞬时表达来鉴定其载体；制备逆转录病毒，感染RB50细胞，通过嘌呤霉素筛选，再挑取单克隆细胞；western blotting检测CRX的表达，大量培养其阳性克隆细胞，制备其核提取物，通过免疫沉淀法纯化CRX蛋白复合体，最后在梯度凝胶中分离其蛋白复合体成员并质谱测序分析。　　 结果：通过质谱分析，发现了CRX蛋白能免疫沉淀32种蛋白，其中有7种热激蛋白、5种解旋酶、5种翻译因子、4种RNA加工因子、3种核糖核蛋白、2种蛋白激酶、2种血影蛋白、2种组蛋白及2种ATP合成酶。　　 结论：CRX蛋白能免疫沉淀32种以前未见报道的蛋白，表明CRX通过一个更复杂的信号通路参与到视网膜的发育。　　 2.SIX家族蛋白对发育分化的影响(Six1基因对C2C12细胞分化的影响)　　 目的：了解外源性Six1基因的表达对C2C12细胞分化的影响。　　 方法：将Six1基因克隆到逆转录病毒载体pOZFHN-puro上，通过在293T细胞中的瞬时表达来鉴定其载体。制备逆转录病毒，感染C2C12细胞，通过嘌呤霉素的筛选得到阳性细胞；应用细胞计数、luciferase分析和western blotting等方法，来分析Six1对C2C12细胞增值与分化的影响。　　 结果：外源Six1基因的表达不改变C2C12细胞的增值和p21的表达，也不影响MEF2的表达，但能通过抑制Myogenin及Myosin的表达来延迟(非抑制)C2C12细胞的分化。　　 结论：Six1通过一个负向调控途径参与对C2C12分化的调控。