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铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是革兰阴性非发酵需氧菌,普遍分布于泥土,生活用水及医院与工业废水中。作为引起伤口化脓性感染的主要致病菌之一,在机体免疫功能降低时,会引发多种疾病,如术后引起伤口感染,同时也可引发脓肿、褥疮、化脓性中耳炎等疾病。随着多重耐药性的菌株不断地更新换代并生成新的生物膜,临床治疗的难度进一步增大。噬菌体作为生物型治剂,重新走入人们的视线。噬菌体是一种浸染细菌的病毒,其遍及自然界各处。随着耐药性细菌变异速度的加快,噬菌体疗法(Phage Therapy)引起了科研学者们的兴趣及一些科研机构的重视。本实验临床分离得到宿主菌后,采用传统的双层琼脂噬斑法在吉大一院医院废水中分离得到毒性噬菌体,并将其命名为PA-YS35。电镜观察显示,噬菌体PA-YS35属于有尾噬菌体目(Caudovirales Order)、肌尾病毒科(Myoviridae family)噬菌体。生物学特性研究发现:(1)PA-YS35头部呈立体对称、直径约45nm,尾部和头部长度相仿、约为45-50nm;(2)PA-YS35的基因组为双链DNA,限制性内切酶图谱分析表明,基因组含有Eco RⅠ,Eco RⅤ,HindⅢ,NdeⅠ和XbaⅠ等几个酶切位点;(3)PA-YS35具有广谱裂解性,30株铜绿假单胞菌临床分离株可高效裂解其中的21株;(4)噬菌体PA-YS35的最佳感染复数(Multiplicity of infection,MOI)为0.01;(5)一步生长曲线显示,PA-YS35有3分钟的潜伏期,爆发期持续21分钟,爆发量为380 PFU/cell;(6)经噬菌体稳定性实验发现,PA-YS35噬菌体在50℃-70℃和p H 4-9的范围内依然有较高的活性和裂解率。噬菌体基因组测序结果表明,噬菌体PA-YS35基因组为线性双链DNA、大小为93,296 bp,GC含量为49.35%,检测出11个t RNA相关基因,其平均长度为77 bp,总长度为850 bp,占基因总量的0.9111%。使用RAST进行基因注释,结果显示,PA-YS35基因组含有172个开放阅读框(Open Reading Frame,ORF),其中有41个可预测其功能,剩余的131个为未知的编码序列。使用RNA连接酶核苷酸序列进行进化树的绘制,发现噬菌体PA-YS35的基因组与铜绿假单胞菌噬菌体Pseudomonas phage PAK P1在同一个分支上,有着较近的进化关系。噬菌体PA-YS35的全基因组序列已提交至Gen Bank,登录号:MF974178.1。综上所述,噬菌体PA-YS35为毒性噬菌体,其潜伏期短,裂解效率高,有较宽的裂解谱和极高的环境适应能力(在50℃-70℃和p H4-9的范围内依然保持较高的裂解活性),可以考虑应用于耐药性的铜绿假单胞菌感染的噬菌体生物制剂的开发。