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1 FMDV vp1基因的克隆及表达 参照GenBank中的O型FMDV(foor-and-mouth disease virus，FMDV)的vp1基因序列设计了一对特异性引物，用PCR方法扩增得到一969bp的DNA片段，测序后以该片段为模板，用特异性表达引物扩增得到目的基因vp1(652bp)。然后克隆到pMD18-T载体中，从T-载体中切下目的片段，定向克隆到pGEX-4T-2中，转化BL21(DE3)，经IPTG诱导后，进行SDS-PAGE实验，目的基因获得高效表达，免疫转印鉴定呈阳性，vp1基因体外获得成功表达。 2 FMDV 3abc基因的克隆及表达 将O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus，FMDV)非结构蛋白基因3ABC首先克隆入pMD18-T Vector，然后亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-2上，成功构建重组表达质粒pGEX／3ABC。将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中表达，表达产物经SDS-PAGE可检测到分子量约为71kD的目的蛋白带，经薄层扫描分析，目的蛋白约占菌体总蛋白的15％。Western blotting分析证明表达产物能被FMDV阳性血清所识别。 3 表达蛋白VP1和3ABC的间接ELISA的建立及应用 FMDV的两种表达产物(VP1，3ABC)经GST.Bind Resin纯化后，作为抗原建立了间接ELISA(VP1-ELISA，3ABC-ELISA)，VP1、3ABC抗原包被浓度分别为58.25μg／ml，7.84μg／ml，血清检测稀释度均为1∶40，抗原与抗体的最佳反应时间为120min。 应用VP1-ELISA和液相阻断ELISA诊断试剂盒同时检测400份临床样品，试剂盒的检出率为88.25％，VP1-ELISA的检出率为86.25％，二者的符合率达98％。 应用3ABC-ELISA和兰州兽医研究所的NSP-ELISA诊断试剂盒同时检测400份临床样品，试剂盒的检出率为3％，VP1-ELISA的检出率为4％，二者的符合率达99％。