大豆蛋白激酶Y82互作蛋白的筛选及功能验证

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bird2000521
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
植物在遭受外界逆境胁迫时,体内的信号传导系统能够感知、传递逆境胁迫信号,并引起各种生理生化反应以适应环境。植物蛋白激酶在信号感知和传导、以及基因的表达调控中起重要的作用。蛋白激酶在信号传导过程的功能是磷酸化修饰目的蛋白,而磷酸化的实现需要蛋白质之间具有相互作用。本研究对从大豆克隆的编码蛋白激酶的基因Y82进行初步功能分析,利用酵母双杂交技术筛选Y82的互作蛋白热激蛋白90家族并进行验证,同时对Y82蛋白激酶的亚细胞定位进行研究,为解析Y82参与的信号传导途径提供理论基础。主要研究结果如下:1. Y82基因的烟草转化及干旱处理:构建Y82的转基因表达载体,通过农杆菌侵染法转化烟草,对转Y82基因烟草的T1代株系进行干旱胁迫试验,初步证明Y82基因的过表达能够增强转基因烟草的耐旱性。2.Y82的亚细胞定位:构建Y82的亚细胞定位载体,基因枪轰击法转化洋葱表皮细胞,培养18h后,于激光共聚焦显微镜下观察。结果表明,GFP-Y82融合蛋白激发的荧光在细胞膜和细胞核均有分布,说明Y82位于细胞膜和细胞核。3. Y82互作蛋白的筛选:构建了Y82的TPR结构域诱饵载体,采用共转化法对大豆旱盐cDNA文库进行多次筛选,对筛选结果进行分析,候选互作蛋白包括热激蛋白90(HSP90s)、蛋白激酶、叶绿素结合蛋白、核糖体蛋白、发育相关蛋白和非生物胁迫相关蛋白。4. Y82-TPR区与HSP90s的互作验证:将大豆HSP90s分为6组,克隆了HSP90-1、HSP90-3、HSP90-6、HSP90-8、HSP90-9、HSP90-12共6个基因,构建酵母体内互作验证载体,与Y82蛋白激酶TPR结构域进行相互作用验证,结果表明,在酵母体内HSP90-3和HSP90-9与Y82蛋白激酶的TPR结构域发生相互作用;构建了双分子荧光互补验证载体YNE-HSP90-3、YNE-HSP90-9和YCE-TPR,PEG介导法转化拟南芥原生质体,暗培养12h后于激光共聚焦显微镜下观察,有黄色荧光产生,说明HSP90-3和HSP90-9与Y82蛋白激酶TPR结构域发生相互作用。
其他文献
锂电池由于具有储能密度大和循环性能优异等特点,是当今重要储能体系之一。社会的不断发展对电池性能提出了更高需求,因此仍需发展具有更高储能密度和更长循环圈数的锂电池体
近年来,随着物联网技术的不断发展与完善,现已广泛应用于人类生活的各个领域。为了实现远程智能化监控就必须借助于远程控制终端,因此高效率、高可靠性、低成本、通用性强的物联
我国陆上首次尾管旋转固井在YK10井顺利实施,取得圆满成功。该井7°尾管使用旋转固井方式,测井显示固井质量为优秀。为塔河油田乃至中国陆上高压油气田目的层提高固井质量
本文主要研究收费制度对垃圾处理的影响,在垃圾处理分析的基础上,引入垃圾分类收费制度,比较垃圾收费制度实施前后的垃圾产生总吨数的变化。本文利用时间序列分析对平稳随机
练琴是音乐表演专业学习中的一个重要环节,二胡作为一件技巧性强、难于控制的乐器,如何运用高质量、正确的练琴方法成为二胡学习者亘古不变的研究与追求。本文以高质量练琴方
“住改仓”问题,在社会发展历程中由来已久,而在广州地区表现得尤为突出。历史上,将商业功能融入具有居住功能的住宅,合二为一的现象十分常见。但随着商业的发展以及社会活动
目的:小麦是重要的粮食作物之一。随着非生物胁迫对种植环境的不断影响,土壤盐渍化成为制约小麦产量和品质发展的重要原因。DNA甲基化作为主要的表观遗传修饰,在植物抵抗非生物胁迫中起调控作用。分析耐盐性不同的春小麦品种生理特性变化及DNA甲基化差异表达模式,从生理和表观遗传学角度揭示DNA甲基化的改变与小麦在盐胁迫条件下抵抗逆境能力的相关性,为DNA甲基化调控小麦耐盐性研究提供理论依据。方法:本研究选择
汤姆斯杯羽毛球比赛从1939年开始到现在,已经举行了30届比赛,从中我们可以看出男团羽毛球比赛中的多种打法及规则不断变化的过程。我国羽毛球男队至今已经夺得10冠军,仅次于
针对目前供变电系统的无功功率补偿器,提出一种基于CAN总线无功功率补偿器,无功功率补偿器CPU采用P80C591作为核心部件,通过外接的测量电路实现参数的采集和控制,并通过CAN总线通信接口可以实现与上位计算机的通信功能,完成供变电系统的信息化和自动化.