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植物在遭受外界逆境胁迫时,体内的信号传导系统能够感知、传递逆境胁迫信号,并引起各种生理生化反应以适应环境。植物蛋白激酶在信号感知和传导、以及基因的表达调控中起重要的作用。蛋白激酶在信号传导过程的功能是磷酸化修饰目的蛋白,而磷酸化的实现需要蛋白质之间具有相互作用。本研究对从大豆克隆的编码蛋白激酶的基因Y82进行初步功能分析,利用酵母双杂交技术筛选Y82的互作蛋白热激蛋白90家族并进行验证,同时对Y82蛋白激酶的亚细胞定位进行研究,为解析Y82参与的信号传导途径提供理论基础。主要研究结果如下:1. Y82基因的烟草转化及干旱处理:构建Y82的转基因表达载体,通过农杆菌侵染法转化烟草,对转Y82基因烟草的T1代株系进行干旱胁迫试验,初步证明Y82基因的过表达能够增强转基因烟草的耐旱性。2.Y82的亚细胞定位:构建Y82的亚细胞定位载体,基因枪轰击法转化洋葱表皮细胞,培养18h后,于激光共聚焦显微镜下观察。结果表明,GFP-Y82融合蛋白激发的荧光在细胞膜和细胞核均有分布,说明Y82位于细胞膜和细胞核。3. Y82互作蛋白的筛选:构建了Y82的TPR结构域诱饵载体,采用共转化法对大豆旱盐cDNA文库进行多次筛选,对筛选结果进行分析,候选互作蛋白包括热激蛋白90(HSP90s)、蛋白激酶、叶绿素结合蛋白、核糖体蛋白、发育相关蛋白和非生物胁迫相关蛋白。4. Y82-TPR区与HSP90s的互作验证:将大豆HSP90s分为6组,克隆了HSP90-1、HSP90-3、HSP90-6、HSP90-8、HSP90-9、HSP90-12共6个基因,构建酵母体内互作验证载体,与Y82蛋白激酶TPR结构域进行相互作用验证,结果表明,在酵母体内HSP90-3和HSP90-9与Y82蛋白激酶的TPR结构域发生相互作用;构建了双分子荧光互补验证载体YNE-HSP90-3、YNE-HSP90-9和YCE-TPR,PEG介导法转化拟南芥原生质体,暗培养12h后于激光共聚焦显微镜下观察,有黄色荧光产生,说明HSP90-3和HSP90-9与Y82蛋白激酶TPR结构域发生相互作用。