猪流行性乙型脑炎（Japanese encephalitis，JE），简称乙脑，是由猪流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)引起的常见病毒性脑炎，对人的致死率高，约为25～40％，对猪的致死率不高，但引起造成怀孕母猪发生繁殖障碍是主要的经济损失，对作为畜牧业支柱产业的养猪业持续增产造成巨大的危害。近年来，乙脑的传染范围不断扩大，严重威胁公共安全和养殖业。而抗乙脑病毒的中和性单抗能够有效地降低病毒的致病能力，且具有较高的特异性和生物学活性，在病毒的诊断检测和治疗预防中有着良好的应用前景。　　 本文用常规的杂交瘤制备技术获得了抗乙脑病毒（N J2008株，GQ918133，以下实验中所用的乙脑病毒均为此株）的7株单抗，用BHK-21细胞培养后冻于-20℃，反复冻融三次后经蔗糖密度梯度离心，将所获纯化病毒免疫BALB/c小鼠，4次免疫后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合，用ELISA法进行筛选，抗原即为免疫原，加强免疫时用EDⅢ，筛选时分别用EDⅢ和纯化的乙脑病毒筛选。最后获得七株能稳定分泌的杂交瘤细胞，分别命名为1H5F9、2D7E4、2B4B4、1H4、2E3、2B4、4D4，然后用常规方法免疫小鼠制备腹水，并测亚型后用ProteinA纯化柱纯化。　　 用ELISA、Western Blot、IFA、流式细胞术以及中和实验等方法鉴定7株单抗的生物学特性。结果显示1H5F9、2D7E4、2B4B4能识别BHK-21细胞的蛋白，1H4和2B4只识别EDⅢ而2E3和4D4两种都能识别，因此1H5F9、2D7E4、2B4B4由于只识别细胞而淘汰，2E3和4D4则在后续的实验作为对照。中和试验结果显示4株单抗都有一定的中和活性，且结果为:2B4＞1H4～4D4＞2E3。临床实例应用进一步证明用特异性和反应性最高的2B4能够检测出感染JEV的小鼠的脑脊液中JEV的存在及水平。　　 根据单抗特性鉴定的结果，1H4和2B4能与JEV的EDⅢ和MEP都反应，且WesternBlot显示表位是在同一个蛋白上，因此推断这2株单抗的识别位点是在EDⅢ和MEP共有序列上的。同时，本文用M13噬菌体展示肽库筛选单抗的表位，以进一步验证上述推断。MegAlign和Blast的结果显示，“HH-H”(E394-E397)是最有可能的结合位点。在此基础上，合成EDⅢ和MEP共有序列多肽，P1:TVN PFV A(E356-E362)和P2: EME PPF GDS YIV VGR GDK QIN HHW HKA(E373-E399)以及含噬菌体筛选出的位点的短肽NHH WHKA(E394-E398)，用ELISA进一步验证，发现1H4与3条肽都反应，而2B4则只与P3反应，并且用P3作为抗原能够检测猪的乙脑阳性血清，说明E394HHWHE398能有效诱导产生抗体，且E396-M很可能是决定中和活性的一个关键位点。空间构象和理化分析显示该位点在β折叠的末端，且E394HHWHE398富含亲水氨基酸，能够作为表位诱导机体免疫反应。因此，该位点对乙脑的进一步研究有着重要的意义，单抗1H4和2B4也有望应用于建立相应的检测方法和疫苗。