犬流感是由犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)引起的以体温升高、咳嗽、呼吸困难为特征的犬的急性传染性疾病,其特点是传播快,流行广。我国和韩国都在呼吸道严重感染犬中分离到H3N2亚型流感病毒,实验发现这种病毒可以在犬之间进行直接传播。在现代生活中,犬是人类的忠实朋友,近年来宠物犬数量急剧增加,这也为犬流感病毒的跨宿主传播提供了更多的机会,人们需要重视这一问题。西药在抗犬流感病毒的临床应用上尚存在极大的局限性,如降低畜禽免疫力,易产生抗药性、具有副作用等。中药毒副作用小、不易产生耐药性,近年来的研究逐渐增多。但是把中药的药理活性、有效成分与药物的基础功效结合起来进行综合性研究的报道仍较少见。本课题基于前期研究成果即中药苦参具有良好的体外抗犬流感病毒效果的结论,以苦参为原材料,进行苦参主要成分的抗流感病毒效果研究。本试验采用稀醇提取、大孔树脂纯化法,从苦参中获得了主要成分即生物碱类,黄酮类,皂苷类和多糖类化合物。用MDCK细胞建立体外实验模型,将苦参提取物进行有效处理,制成可用于MDCK细胞的药物制剂,以利巴韦林为阳性对照,应用细胞病变观察法和MTT法检测细胞活性,对苦参成分的抗犬流感病毒效果进行评价。首先测定各成分对MDCK的最大无毒浓度,然后在安全浓度范围内比较四种成分的抗犬流感病毒效果,通过改变给药时间及作用方式初步探讨有效成分抗犬流感病毒的作用环节,最后确定其最小有效浓度。结果表明:苦参四种主要成分的最大安全浓度在3.344μg/m L~1.229 mg/m L之间。四种主要成分均有显著的抗CIV效果(P<0.05)且综合作用效果均优于利巴韦林。不同给药方式试验结果显示:(1)苦参四种成分均能阻止CIV吸附进入细胞,且效果均显著优于利巴韦林(P<0.05),生物碱和皂苷类的效果优于其他两种成分;(2)苦参四种成分均能干扰CIV的合成与释放;(3)病毒和药物同时接触细胞时,苦参四种成分均能起到抑制CIV的作用,生物碱类与利巴韦林作用相近,但黄酮、皂苷、多糖类成分的效果显著低于利巴韦林(P<0.05);(4)药物与病毒预先作用时,苦参四种成分均能起到显著的杀灭CIV的作用,皂类与利巴韦林的作用相近,但生物碱、黄酮、多糖成分的效果显著低于利巴韦林(P<0.05)。苦参有效成分的最小有效浓度在0.2090μg/mL~0.0474 mg/m L之间。不同成分的治疗指数(TI)在16~128之间,其中生物碱和多糖的治疗指数最高,为128,皂苷的治疗指数为32,黄酮的治疗指数为16。