肝癌是世界上最常见的癌症之一,是消化系统常见的恶性肿瘤,早期很难察觉,一旦发现大多是晚期,死亡率极高。因此,早诊断早治疗显得尤为重要。肿瘤标志物和基因检测可用于癌症的早期筛查。基因CYP1A1与癌症的发生密切相关,肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP)也是肝癌普查的重要指标之一,因此检测这两种物质具有重要意义。传统的检测SNP的方法依赖于凝胶电泳或基因测序技术,对仪器要求高,限制了应用范围。广泛用于临床的AFP检测方法有酶联免疫吸附测定、荧光免疫分析、质谱等,这些方法灵敏度高,均能实现对血清中肿瘤标志物的快速、准确、半定量检测,但是仪器昂贵,需专业技术人员操作,检测成本高,不能实现即时检测。因此,探索即时检测方法具有研究价值。胶体金层析试纸条是一种基于比色法的检测方法,利用胶体金的颜色深浅,实现裸眼半定量检测。胶体金层析试纸条具有操作简单、检测快速、应用成本低、能用于即时检测等优点,被广泛用于医学诊断、环境监测和食品安全检测等领域。酶信号放大技术是一种优良的信号放大手段,利用酶的催化效果,能够提高检测的灵敏度。辣根过氧化物酶(HRP)能催化底物3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)生成红色不溶物,将HRP标记到胶体金表面,利用其催化反应能够实现颜色信号的放大。针对传统的SNP和AFP检测方法仪器昂贵、操作复杂、不能满足即时检测的缺点,以及目前没有易感基因与肿瘤标志物联合检测的状况,本文提出将HRP与胶体金层析试纸条相结合,建立了一种同时检测SNP和AFP的胶体金试纸条,实现了SNP位点的判别和血清中AFP含量的检测。主要研究内容如下:(1)建立了一种能同时检测癌症易感基因CYP1A1和AFP的胶体金试纸条,该试纸条有两条检测线,一条检测线上发生碱基互补配对用于易感基因的碱基类型判别,另一条检测线上发生抗原抗体反应用于AFP的半定量检测,最后通过HRP催化底物AEC实现信号放大。(2)对胶体金试纸条可视化检测SNP位点和AFP含量的可行性进行验证,并优化反应条件,确定了该检测方法的线性范围,并成功用于实际样品中SNP和AFP的检测。(3)在最优条件下,AFP在20-200 ng/mL范围时具有良好的线性关系(R~2=0.998),其它百倍的蛋白对检测无明显干扰,表明该方法选择性好。该试纸条对实际血液样本感基因CYP1A1和AFP的检测与标准方法相符合,实际样品的加标回收率在90%-110%之间,说明该方法具有较好的准确性,能够用于实际样品易感基因SNP位点碱基类型的判断和肿瘤标志物的半定量检测,因此具有很好的应用潜力。