猪卵母细胞胞质内单精子显微受精相关问题的初步研究

来源 :广西大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zanyunfeng
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本研究主要探讨猪早期胚胎培养数量与培养微滴体积关系及显微操作时间、不同精子处理、胰岛素对猪ICSI胚胎早期发育的影响,为完善猪单精子胞质内显微受精技术提供理论依据。本研究发现:(1)、100μL的培养微滴中培养30-70个猪电激活胚胎,其分裂率显著高于5胚胎组(64.0%,65.2%,67.1%vs52.0%,P<0.05)而与15胚胎组差异不显著;囊胚率方面,70胚胎组(3.0%)最高,与50胚胎组(1.7%)无显著差异,却与5,15,30胚胎组的差异显著(P<0.05);而各组的囊胚细胞数之间没显著差异。(2)、在10-60μL的培养滴中分别培养30个猪孤雌胚胎,其囊胚率和扩张囊胚率均无显著差异(P>0.05),其中30μL微滴组的囊胚率(28.8%)和扩张囊胚率(20.0%)均最高,但与60μL组,45μL组比较相近;(3)、当10-60μL的培养滴中分别培养20个胚胎时,各组分裂率,囊胚率之间均无显著差异(P>0.05);(4)、当10-60μL的培养滴中分别培养15个胚胎时,各组分裂率、囊胚率的差异也不显著(P>0.05);(5)当5-60μL的培养滴中分别培养10个胚胎时,15μL组获得较高的分裂率并显著的高于在45μL组(89%vs68%,P<0.05),其囊胚率也最高并显著高于5μL组(38%vs16%,P<0.05)。(6)、在不同操作时间对猪ICSI效果研究中,第3小时注射的胚胎,其分裂率较高,但与第1,2,4小时无显著差异(81.64%vs70.12%,76.88%,74.44%P>0.05),其时间变化曲线图呈先增高后下降的规律。而ICSI操作于第4小时的胚胎囊胚率显著低于前三小时的囊胚率(5.90%vs 20.59%,18.37%,15.17%,P<0.05),并且与第一,第二小时的胚胎囊胚率有着极显著的差异(P<0.01)。随着操作时间的延长,这四小时的囊胚率呈现下降趋势。(7)、鲜精、冻精及其断尾处理对猪ICSI胚胎的分裂率和囊胚率没有显著影响(P>0.05);(8)、在胚胎培养液中添加2.5-10μg/ml胰岛素(INS)能提高猪ICSI胚胎的分裂率,但效果不显著(P>0.05)。囊胚率方面,处理组均高于对照组。当INS为5.0μg/ml时其囊胚率显著高于对照组(18.22%vs3.60%,P<0.05)。结论:(1)、100μLNCSU-23培养滴中培养50-70个猪早期胚胎得到较理想的效果;(2)、30个猪早期胚胎在30μL-60μL的培养滴中培养有较好的发育效果,其中30μL最优;(3)、培养15-20个胚胎的培养滴体积选择在10-60μL之间;(4)、10个胚胎的培养滴体积的选择可在10-60μL之间,但15μL的滴可得到最佳的培养效果;(5)、猪卵母细胞ICSI操作时间不宜超过3h,但最好在2h内;(6)、不管是冻精还是鲜精,不管断尾与否,对猪ICSI效果无显著影响;(7)、为简化ICSI程序,提高效率,超声波断尾是个理想办法;(8)、胰岛素能促进猪早期胚胎发育,其中5 μg/ml的浓度最理想;
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