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肝细胞癌(HCC)是世界范围内常见的恶性肿瘤之一,具有较高的发病率与死亡率。研究证明,转移和复发是导致肝癌病人预后不良的主要原因,如何预测和治疗肝癌的复发和转移是当今肝癌研究的重点之一。肿瘤转移过程的发展是多步骤、多因素、多基因共同参与的复杂过程,尽管有关肝癌转移的机制已经有了大量的研究与探讨,但是转移的分子基础和机制尚不清楚。对于许多原发性肿瘤而言,肿瘤细胞转移至局部淋巴结可被认为是肿瘤转移的早期信号。为了深入阐明肝癌淋巴道转移的分子机制,寻找与肝癌淋巴道转移相关的蛋白质分子,本课题组前期采用双向凝胶电泳-质谱技术比较高、低转移潜能的肝癌细胞株Hca-F(高转移株)、Hca-P(低转移株)的蛋白质表达谱的差异。结果发现蛋白质表达质谱改变明显,其中ERp29在Hca-P中显著升高。本实验采用免疫蛋白印迹及免疫细胞化学等方法对比较蛋白质组学筛出的差异蛋白ERp29在淋巴道转移潜能不同的小鼠肝癌细胞系中的表达情况进行验证,为进一步研究肝癌的淋巴道转移机制奠定基础。目的:在本实验室前期实验的基础上,以小鼠腹水型肝癌高低淋巴道转移株(Hca-F、Hca-P)为模型,从蛋白质水平上对比较蛋白质组学筛出的差异蛋白ERp29在淋巴道转移潜能不同小鼠肝癌细胞系中的表达情况进行验证。方法:构建小鼠腹水型肝癌细胞株Hca-F、Hca-P淋巴道转移动物模型,通过流式细胞术、细胞免疫组化、免疫荧光以及蛋白免疫印迹等方法检测ERp29蛋白在Hca-F、Hca-P细胞株中表达有无差异,为进一步研究肝癌淋巴道转移的机制奠定基础。结果:细胞免疫组化、免疫荧光结果显示ERp29蛋白在Hca-F、Hca-P中均有阳性表达,定位于细胞胞浆,部分细胞核也有表达。流式细胞仪检测结果显示,空白组、Hca-F、Hca-P中ERp29蛋白的表达率分别是2.26%、29.36%、45%,Hca-F、Hca-P细胞表面都有较强的荧光强度,说明Hca-F、Hca-P细胞表面有较高的ERp29蛋白表达,且表达有明显差异(P<0.05)。免疫蛋白印迹的结果显示,以β-actin为控制带,目的条带灰度与其灰度的比值进行比较,Hca-F、Hca-P分别是β-actin的1.1和1.8倍。在Hca-P中的表达明显高于Hca-F(P<0.05)。结论:ERp29在小鼠腹水型肝癌细胞系Hca-F和Hca-P均有表达,且Hca-P中较高,而在Hca-F中表达较低。这说明了ERp29可能与淋巴道转移有关,具体机制还有待于进一步的探讨和研究。研究ERp29在淋巴道转移潜能不同小鼠肝癌细胞系中的表达,有助于进一步了解肝癌发生发展机制,为肝癌的诊断与治疗提供一条新的途径。