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目的:交感神经系统过度激活（sympathetic hyperactivation）引起心肌细胞凋亡、炎症损伤是促进心血管疾病进展的重要原因。藏红花醛（safranal,SFR）在最近的研究中显示出良好的心肌保护作用,但其在交感神经过度激活引起的心肌损伤中的作用机制尚不完全清楚。本研究利用网络药理学、分子模拟对接和动物、细胞实验验证等方法,从多个角度来探讨藏红花醛对异丙肾上腺素（isoproterenol,ISO）引起心肌损伤的作用及机制,为心肌损伤的实验药物研发和藏红花醛的临床应用提供一些新的理论依据。方法:1.动物实验:皮下注射ISO构建心肌损伤大鼠模型,实验分为Control组、ISO组（85 mg/kg）、ISO+SFR-L组（藏红花醛给药0.025 m L/kg）、ISO+SFR-M组（0.050 m L/kg）和ISO+SFR-H组（0.075m L/kg）。通过血清检测分析CK、CK-MB的酶活力,HE染色观察心肌组织的形态变化、炎症浸润,Masson染色评价心肌的纤维化水平,TUNEL染色分析心肌的凋亡水平,免疫组织化学染色检测分析大鼠心肌中caspase-3,Bax,Bcl-2的表达变化,Western blot检测分析大鼠心肌组织cleaved-caspase-3,Bax,Bcl-2的表达变化。2.细胞实验:（1）通过ISO诱导H9c2细胞,建立心肌细胞凋亡损伤模型,分为Control组、ISO组、ISO+SFR（浓度分别为20μM,40μM,80μM）组。CCK-8检测ISO、藏红花醛对细胞的存活率的影响,LDH活性检测观察细胞损伤情况,Hoechst 33342染色观察并计算凋亡细胞核的阳性率,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western blot检测分析H9c2细胞cleaved-caspase-3,Bax和Bcl-2的表达变化。（2）网络药理学预测:（1）靶点分析:预测藏红花醛治疗交感神经过度激活导致的心肌损伤的潜在作用靶点,筛选共同核心靶点;（2）通路预测:整合共同靶点,预测藏红花醛与交感神经过度激活引起的心肌损伤相关的通路;（3）分子对接:将通路中富集的核心靶点与藏红花醛进行分子对接,分析构象变化和结合强度。（3）机制验证:根据网络药理学预测出的藏红花醛与交感神经过度激活引起的心肌损伤相关的靶点、通路和分子对接的结果,利用H9c2细胞进行实验验证。结果:1.动物实验结果:血清CK、CK-MB酶活力检测结果显示藏红花醛减轻交感神经过度激活诱导的心肌损伤水平（P＜0.01）,HE染色、Masson染色、TUNEL染色和免疫组化染色结果显示藏红花醛可以降低ISO刺激引起的心脏炎症浸润、凋亡、纤维化水平（P＜0.01）,降低心肌中caspase-3、Bax的表达水平,增高Bcl-2的表达水平（P＜0.001）。Western blot结果显示ISO可促进心肌凋亡,上调了凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3的表达,下调了抗凋亡蛋白Bcl-2的表达（P＜0.001）,藏红花醛预给药可显著下调大鼠心肌组织Bax、cleaved caspase-3的表达水平（P＜0.05）,上调Bcl-2的表达水平（P＜0.01）。2.细胞实验结果:（1）CCK-8结果显示藏红花醛可升高ISO所降低的细胞活力（P＜0.001）;LDH检测结果说明藏红花醛可降低ISO导致的细胞损伤水平（P＜0.01）;Western blot法显示ISO可促进H9c2细胞凋亡,上调Bax、cleaved caspase-3的表达,下调Bcl-2的表达（P＜0.001）,藏红花醛预处理可显著下调Bax、cleaved caspase-3的表达水平（P＜0.01）,上调Bcl-2的表达水平（P＜0.05）;Hoechst 33342和流式细胞术显示ISO可增加H9C2心肌细胞凋亡率（P＜0.001）,藏红花醛可显著降低各预处理组细胞的凋亡率（P＜0.01）。（2）通过TCMSP数据库、SWISS数据库、Pharm Mapper及QSAR数据库预测藏红花醛潜在作用靶点,利用Dis Ge NET、Gene Cards数据库分别获得交感神经过度激活及心肌损伤靶点,绘制Venn图得到共有靶点26个。根据String数据库中PPI的度值（Degree）确定核心靶点排序。KEGG富集分析提示,藏红花醛抗交感神经过度激活引起的心肌损伤的机制可能与调节TNF信号通路密切相关,并通过调节TNF信号通路相关靶点（TNF、CAS3、PTGS2、MMP9、RELA）发挥保护作用。同时,分子对接结果显示藏红花醛可与TNF通路相关靶点相互作用形成致密复合物。（3）细胞实验验证ISO诱导H9c2细胞TNF、PTGS2、MMP9、p RELA蛋白表达上调（P＜0.001）,藏红花醛可以显著下调TNF、PTGS2、MMP9、p RELA的蛋白表达（P＜0.01）。结论:1.藏红花醛可以改善异丙肾上腺素诱导的心肌损伤;2.在交感神经过度激活导致的心肌损伤中,藏红花醛可能通过调节TNF信号通路及相关靶点发挥心肌保护作用。