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猪胰高血糖素样肽-2(pGLP-2)能够特异性地促进肠黏膜生长,加速损伤修复,为治疗“仔猪断奶综合症”提供了新的途径,但pGLP-2易被二肽酰肽酶Ⅳ(DPP-IV)快速降解,严重制约了其应用,亟需研发延长其半衰期的技术。本文采用聚乳酸羟基乙酸聚合物(PLGA)包被pGLP-2制成PLGA/pGLP-2微球载药系统,延长了pGLP-2在体内的释放时间,并在小鼠及仔猪试验中取得了较好的肠道修复效果。试验一：pGLP-2/PLGA微球的制备本试验探究了复乳法(W/O/W)及水包油包固体法(S/O/W)制备出微球的区别；优化了S/O/W法制备微球的工艺；研究了在外水相加入NaCl及油相添加聚乙二醇(PEG)对微球内药物释放的影响。结果表明：(1)S/O/W法较W/O/W法制备的微球载药量相近,但粒径较均一,突释低,且表面圆整光滑,无较大微孔。(2)使用S/O/W法制备微球,优选出了理论载药量为1%、转速为2000rpm、PVA浓度为2%, PLGA浓度为100mg/mL、DCM/DMSO体积比为40作为制备工艺,制备出包封率为72%、突释率为16.62%、粒径为37.5μm的微球。(3)在油相添加10%PEG会增加微球表面孔径及微球粒径,加速药物的释放,突释较高。外水相添加5%NaCl能降低微球粒径及突释,但对药物释放无明显改变,在外水相中添加5%NaCl的同时在油相中添加10%PEG能在加速药物释放的同时不显著提高突释。小结：采用S/O/W法优化工艺后制备出的微球包封率为72%、突释率为16.62%、粒径为37.5μm,添加NaCl和PEG能加速微球的药物释放,使其在体外稳定释放9天以上。试验二：pGLP-2/PLGA微球对DSS诱导结肠炎小鼠损伤修复的研究本试验选取30只雄性BALB/C小鼠按体重随机分为对照组、葡聚糖硫酸钠组(DSS组)、微球组。对照组每日饮用蒸馏水,第一天腹腔注射300μL生理盐水；DSS组每日饮用4%DSS,第一天腹腔注射300μL生理盐水；微球组每日饮用4%DSS,第一天腹腔注射300gL含10mg微球的生理盐水。试验第10天小鼠称重后屠宰,采血,分离血清,测定测量小肠及结肠长度、称重；取2份十二指肠、结肠样品,1份中性甲醛固定,进行常规石蜡切片,HE染色；另1份提取RNA,进行RT-PCR。结果表明：(1)DSS组较对照组小鼠体重、结肠长度、十二指肠绒毛高度及绒毛隐窝比显著降低；注射一次pGLP-2微球能显著抑制DSS引起的体重降低、结肠长度变短,且小鼠小肠重量较对照组和DSS组显著提高,结肠重量较对照组显著提高。(2)饮用DSS能显著增加小鼠体内炎症,注射一次pGLP-2微球能抑制DSS引起的小鼠结肠炎性评分的升高及结肠内炎性因子FN-γ、TNF-α、IL-6、IL-10mRNA表达的增加。(3)DSS能破坏小鼠肠道完整性,注射一次pGLP-2微球能抑制由DSS引发的血液DAO含量、结肠MPO含量、结肠Claudin-1mRNA表达的增加及结肠Occludin、ZO-1mRNA表达的降低。小结：一次注射pGLP-2/PLGA微球能显著抑制由DSS引发的体增重降低,结肠变短,肠道屏障破坏及体内炎症增加等不良影响。试验三：pGLP-2/PLGA微球对LPS诱导断奶仔猪肠道损伤的保护作用本试验选取18头断奶仔猪,按体重随机分为对照组、脂多糖组(LPS组)、微球组。对照组于第1天、第8天注射2mL生理盐水；LPS组于第1天注射2mL生理盐水,第8天腹腔注射100μg/kg BW的LPS；微球组于第1天注射100mg按理论载药量为2%制备的微球,第8天腹腔注射100μg/kg BW的LPS。注射LPS3h后,将仔猪屠宰,取注射LPS前后血液测定IL-6、IgA、DAO等指标；取十二指肠、空肠、回肠,一份用中性甲醛固定,进行常规石蜡切片,HE染色；一份提取RNA,进行RT-PCR。结果表明：(1)LPS组较对照组仔猪十二指肠、空肠的绒毛高度及绒毛隐窝比显著降低,微球组较LPS组仔猪十二指肠绒毛隐窝比显著提高,微球组回肠绒毛高度及绒毛隐窝比LPS组及对照组显著提高。(2)注射LPS后LPS组仔猪血液IL-6、IgA、DAO的含量显著提高,而pGLP-2微球预处理的仔猪在注射LPS前以上血液指标无显著变化。(3)LPS组较对照组空肠Occludin mRNA表达显著降低,Clauidin-1、IL-8、TNF-α mRNA表达显著增加,微球组较LPS组仔猪十二指肠ZO-1mRNA显著提高,空肠IL-8mRNA表达显著降低。小结：注射一次pGLP-2/PLGA微球能显著提高肠道屏障功能,缓解由注射LPS引发的炎症。全文结论：采用S/O/W法能制备出包封率为72%、突释率为16.62%、粒径为37.5μm、在体外稳定释放9天以上的pGLP-2/PLGA微球。一次注射pGLP-2微球能有效地缓解DSS刺激下小鼠及LPS刺激下仔猪肠道损伤的修复。