利用ISSR标记对甘薯种质资源的遗传多样性分析

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甘薯是我国国民生产中的重要作物之一,近年来随着甘薯的食用、药用、工业、饲料价值的深度开发,甘薯育种工作也倍受重视。培育高产、优质、抗逆性强、耐储藏的优良甘薯品种,是实现甘薯生产可持续发展的首要措施,是甘薯育种工作者的长期目标。而明晰甘薯品种之间的亲缘关系,调查它们的遗传多样性,对育种工作有着重要的指导意义。本研究利用ISSR分子标记对70份具备优良性状的甘薯品种进行遗传多样性研究,分析这些品种之间的亲缘关系,旨在为杂交育种提供一定的理论依据。本研究通过实验两轮正交试验分析,优化了适合于甘薯遗传多样性分析的ISSR的反应体系:在20μL的反应体系中,含40ng DNA,1.25 mmol/L MgCl2,0.25 mmol/L dNTP mix,1.00μmol/L引物,2 U Taq酶,2μL 10×PCR buffer,0.4μL2.0%甲酰胺比较适合甘薯DNA的特异扩增。本研究优化的ISSR反应程序为:94℃预变性5min→94℃变性50s→55-50℃退火45s→72℃延伸1min30s→10个循环→94℃变性45s→52℃退火45s→72℃延伸1 min30s→35个循环→72℃延伸7 min。本研究从16个ISSR引物中筛选出8个扩增强、重复性好、带型清晰的引物进行扩增。结果显示:8个引物共扩增出65个条带,平均每个引物扩增出8.125个条带,其中多态性带61个,多态位点百分数达93.8%,具有良好的多态性。将任一扩增带看作一个性状,按带的有无列出二元数据矩阵,利用NTSYS-pc软件计算出材料间的Jaccard遗传相似性系数。70个甘薯品种基因型的遗传相似性分析表明,其相似性系数分布在0.54~0.95之间,这表明这些品种基因型之间的遗传多态性较为丰富。通过非加权算术平均聚类(UPGMA)的方法,绘制出这些甘薯品种基因型之间的遗传关系树状图。70个甘薯品种大致分为两大类群。其中第一大类有48个甘薯品种,其中以国内品种为主,说明不少产自我国的甘薯品种遗传基础具有一定的相似性。同时中国甘薯地方品种的遗传变异十分丰富,这也支持了中国是甘薯的次生多样性中心的观点。聚类结果表明,国内农家种既有明显的遗传差异,同时也表现出较强的相关性;从美国引进的品种遗传距离较远,具有很好的多态性和育种价值;从日本引进的品种大多独立聚在一类,亲缘关系较近。通过ISSR-PCR扩增,部分品种产生了特异带,部分品种不具有某些特异带。据此,可以对其进行品种鉴定。有的品种用一个引物进行ISSR扩增难以区别,必须采用几个引物。研究表明ISSR标记技术都能较好地反映甘薯品种之间的遗传差异,揭示甘薯品种的遗传多样性。同时,文中还就ISSR技术方法问题进行了讨论,并对遗传育种工作提出一些建议。
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