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研究背景和目的:近几年,冠心病(coronary heart disease,CHD)发生率和死亡率不断攀升,给社会造成极大的负担。CHD的病理基础是炎症、动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)和血栓形成。当血管受到某些因素的刺激时,血管内皮细胞和白细胞相互作用引发炎症级联反应,促进单核细胞与内皮细胞的粘附,进而促进AS的形成。细胞间粘附分子1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)是粘附分子免疫球蛋白超家族中的一员,可与血管内皮细胞紧密结合,参与粘附反应起始过程。混合系激酶区域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)是一种激酶样蛋白,已被证明在肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)诱导的程序性坏死下游通路中起着重要作用。程序性坏死释放大量炎症介质和损伤相关因子,参与缺血性心血管疾病等的发生。本课题组前期研究发现MLKL通过抑制自噬加重炎症反应,从而促进AS的发生和发展。然而,MLKL是否通过促进ICAM-1的表达参与内皮细胞的粘附过程进而影响AS的发生发展尚未清楚,其中的相关机制仍需进一步探讨。MLKL在人体多个器官中广泛存在,大量研究表明,MLKL可作为多种恶性肿瘤(胃癌,胰腺癌等)的生物标记物,但是MLKL与心血管疾病的研究甚少,本研究检测CHD患者血清MLKL水平,分析MLKL水平与CHD的相关性,为CHD辅助诊断及预后评价提供新的实验室依据。研究内容与方法:1.人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)和THP-1单核细胞均购于美国标准菌库(American type culture collection,,ATCC)。(1)HUVECs转染MLKL小干扰片段或过表达载体后,用qPCR和免疫印迹检测MLKL和ICAM-1的mRNA和蛋白表达水平;(2)HUVECs转染MLKL小干扰片段或过表达载体24h后,加入CFSE绿色荧光标记的THP-1单核细胞,并用倒置荧光显微镜拍照。用Image-J软件测量荧光点个数,即为粘附在HUVECs上的THP-1单核细胞数。2.收集100例CHD患者血清标本,根据临床症状分为急性心肌梗死组(AMI)30例、不稳定性心绞痛(UA)组35例、稳定性心绞痛(SA)组35例3组。根据冠状动脉造影结果又分为单支病变22例,双支病变25例,以及三支病变53例3组。正常对照组为非CHD健康体检者30例。采用酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测血清MLKL水平,分析MLKL水平与CHD的相关性。结果:1.HUVECs中过表达MLKL后,ICAM-1的表达水平上升,THP-1单核细胞对HUVECs的粘附作用增强;相应地,HUVECs中干扰MLKL后,ICAM-1的表达水平下降,THP-1单核细胞对HUVECs的粘附作用减弱。2.CHD组的MLKL水平高于正常对照组;MLKL含量在AMI组最高,且在冠状动脉三支病变者最高;MLKL与NT-ProBNP、CRP水平正相关;AMI组和UA组的血清MLKL水平与Gensini评分正相关。结论:1.MLKL通过上调ICAM-1的表达增强THP-1单核细胞对HUVECs的粘附作用,从而促进AS的形成;2.MLKL水平与CHD发病和病变程度正相关,可将其用于CHD的辅助诊断和病情评估。