【摘 要】
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该部分论文工作主要进行人ACAT1 mRNA的反式剪接及其细胞(in vivo)、无细胞(in vivo)研究体系构建、人ACAT1 mRNA反式剪接的3′受体序列和外显子Xb定位等研究,为深入探索相应
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院
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该部分论文工作主要进行人ACAT1 mRNA的反式剪接及其细胞(in vivo)、无细胞(in vivo)研究体系构建、人ACAT1 mRNA反式剪接的3′受体序列和外显子Xb定位等研究,为深入探索相应的剪接机器和特殊的剪接因子等提供基础.首先,进行人ACAT1 mRNA在细胞(in vivo)体系中的反式剪接及其研究体系构建.为了检测外源转染表达的人ACAT1 pre-RNAs是否可以在人源细胞系中发生反式剪接,分别构建用于外源表达人ACAT1 pre-RNAs作为剪接5′供体和3′受体发生反式剪接的产物和内源反式剪接的产物相区分.通过单独或共同转染能表达5′供体和3′受体的质粒到人源细胞系,再利用外源转染表达的5′供体或3′受体上的特异标记序列为引物进行RT-PCR并测序鉴定分析,综上所述,在反式剪接及其体系构建研究中,既直接证实人ACAT1 pre-RNAs(5′供体和3′受体)在细胞(in vivo)与无细胞(in viro)研究体系中都能发生准确的反式剪接,也成功构建相应的研究体系,这一定会促进今后的各项深入研究;而3′受体序列对反式剪接的影响研究表明,小至71nt、大至270nt的pre-RNAs作为3′受体,均可发生反式剪接、但效率有所不同,此也为纯化和鉴定特殊的剪接因子等研究奠定了很好的基础;最后还进行外显子Xb定位分析,为深入研究Xb的来源及反式剪接机制等提供了有关的线索.
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