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人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是新生儿出生缺陷最常见的感染性病因,其先天性感染常导致胎儿神经发育畸形。人神经前体细胞(human neural progenitor cells,NPCs)是先天性HCMV感染时胎脑中最敏感的靶细胞,也是胎脑发育的关键。由于HCMV感染具有严格的种属特异性,对HCMV感染完全容许的人NPCs是研究HCMV感染导致神经发育异常的理想细胞模型。但HCMV感染导致NPCs增殖和分化异常的机理尚不清楚。Notch通路不仅是维持NPCs自我更新的关键,而且是调控NPCs分化的开关。因此,本课题首先建立了HCMV感染的NPCs模型研究其感染特性,进一步基于该模型研究了HCMV感染对Notch通路的影响。 我们从多个不同胚龄的胎脑中分离鉴定了NPCs,建立了人的神经干细胞库。利用该干细胞库研究了NPCs的干细胞特性及其对HCMV易感性的差异。结果显示:不同胚龄的NPCs的干细胞特性及其对HCMV的易感性无明显差异;经体外连续传代以后晚期代数(>P11)的NPCs对HCMV的易感性更高。晚期代数NPCs仍表达已知的神经干细胞的标志分子,但是胶质细胞的特性增强,提示长期传代后NPCs往胶质细胞方向分化,且胶质方向分化的NPCs对HCMV更敏感。 Notch信号通路是维持NPCs的多能性及调控NPCs分化的开关,我们进一步研究了HCMV感染NPCs对Notch通路的影响。结果显示HCMV感染下调了Notch1/Jag1的转录水平和NICD1/Jag1的蛋白水平,同时诱导NICD1/Jag1的细胞定位发生改变。这一过程受蛋白酶体和溶酶体系统的调控。在众多病毒组分中发现pp71可以通过蛋白酶体和溶酶体系统参与调控内源性和外源性NICD1/Jag1的降解。 通过以上研究,我们初步建立了NPCs库,重建了HCMV感染的NPC模型,为持续性研究HCMV感染导致神经发育异常的机制提供了平台。利用这一平台研究了HCMV感染NPCs对Notch通路的影响,初步揭示了HCMV感染致神经发育异常的可能机制之一。