萱草花粉的离体萌发、贮存及遗传转化研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tjh2088
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遗传转化在基因功能研究和优良作物培育中起着至关重要的作用。目前大多数遗传转化方法都需要结合组织培养再生,涉及复杂、漫长的过程,特别是许多重要经济作物很难再生。以花粉为遗传转化受体,转化后的花粉可直接授粉产生转基因种子,避免了组织培养的障碍,大大缩短了获得转基因种质的周期,是一种值得研究推广的转化方法。本研究确定了萱草花粉离体萌发最适培养基为10%蔗糖、0.05%硼酸、0.3%氯化钙、0.2%氯化镁、0.1%硝酸钾、0.035%赤霉素、1%琼脂,最适培养温度为25℃。并将离体萌发与醋酸洋红染色法相结合,筛选出的萱草花粉最佳贮存条件为干燥花粉6 h后再进行-80℃低温贮存。利用离体萌发与台盼蓝染色相结合的方法评估了萱草花粉电击和基因枪转化的可行性,结果显示,选择既可使萱草花粉大比例穿孔,又能保持花粉活性的电击条件来提高电击转化率;调节基因枪参数,使携带外源基因的微弹颗粒可通过基因枪轰击进入花粉以实现转化是我们日后研究中需要主要关注的问题。萱草花粉磁转染以磁性纳米基因载体MNP负载p CAMBIA3301质粒,在外加磁场下,MNP携带外源DNA进入花粉并释放DNA,DNA成功整合到萱草基因组中并实现了表达。萱草花粉的离体萌发、贮存及遗传转化研究,为萱草的分子生物学研究奠定了基础,并促进了百合科植物的基因功能研究及转基因新品种培育的进程。
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