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猪圆环病毒2型(PCV2)属于圆环病毒科,能够引起包括断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪呼吸系统综合征(PRDC)、猪皮炎与肾病综合征(PDNS)、仔猪先天性震颤(CT)等多种疾病在内的猪圆环病毒相关疾病(PCVAD).此外,PCV2感染能够引起机体免疫抑制,容易诱发多种细菌及病毒的混合感染与继发感染。PCV2感染严重影响了世界养猪业的发展,给养猪产业造成了重大的经济损失。商品化疫苗能够诱导产生特异的保护性抗体,但是PCV2仍然在免疫猪群中循环传播,而且PCV2的基因组也在不断变异,因此人们怀疑现有商品化疫苗不能够对PCV2提供完全保护。随着我国、美国、韩国等国家陆续出现PCV2的变异毒株及疫苗免疫失败的案例,PCV2新型高效疫苗的研制及特异性检测方法的建立显得尤为重要。为此,本研究主要从以下两个方面展开：1-猪圆环病毒2型感染性克隆的构建通过基因克隆技术在PCV2 ORF1的终止密码子(TGA)前引入Hind Ⅲ限制性内切酶位点(AAGCTT),将获得的PCV2 WH株基因组自环化后转染PK-15细胞,盲传5代。间接免疫荧光实验和全基因组测序发现,通过感染性克隆技术拯救己获得具有分子标记的克隆毒株H-PCV2,可通过PCR限制性片段长度多态性分析与亲本毒株相区别。通过对拯救毒株H-PCV2的生物学特性研究发现,虽然插入的Hind Ⅲ酶切位点在病毒复制早期减缓了病毒的增殖,但拯救毒株与亲本毒株的增殖规律类似,且第15代病毒的效价能够达到104.8 TCID50/mL。通过对不同代次的H-PCV2全基因组测序发现嵌入的分子标记具有较高的稳定性,为将来区分疫苗毒株与野毒株奠定了基础。2.猪圆环病毒2型抗体检测ELISA方法的建立为探索PCV2基因组中新的诊断抗原表位,通过生物信息学分析PCV2基因组中除ORF2外可能存在的特异性抗原片段,随后合成7条短肽。将合成短肽通过间接ELISA和Dot-ELISA方法鉴定其与PCV2阳性血清的反应原性,仅发现多肽ORF9p具有反应原性。进一步将ORF9p作为包被抗原,建立检测PCV2抗体的间接ELISA方法(ORF9p-ELISA)。将ORF9p-ELISA与商品化的PCV2抗体检测试剂盒比较分析发现,新建立的间接ELISA方法的相对敏感性和特异性分别为84.5%和92.9%,两种检测方法的符合率为86.7%。随后,利用新建立的ORF9p-ELISA方法分别检测PCV2感染组、灭活疫苗免疫组及对照组鼠血清,发现PCV2感染或灭活疫苗免疫都能够刺激小鼠产生针对PCV2的特异性抗体。比较分析三组的OD630nm可知,PCV2感染组与灭活疫苗免疫组具有类似的抗体消长规律,而对照组抗体检测为阴性。这些结果表明本研究发现了一个新的多肽ORF9p能够与PCV2阳性血清发生特异性反应,并且利用ORF9p短肽作为包被抗原建立的ORF9p-ELISA方法能够特异性的检测PCV2抗体。