栀子浸膏治疗兔膝骨性关节炎的实验研究

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目的:通过观察栀子浸膏对兔膝骨关节炎模型关节软骨形态,软骨基质中Ⅱ型胶原和蛋白多糖含量,软骨、滑膜、血清及关节液中IL-1表达的影响,探讨其治疗骨关节炎的作用机制,为栀子治疗骨关节炎提供理论依据。 方法:健康六月龄大耳白兔35只,雄性18只,雌性17只,雌雄各半,体重1.5~2.0kg,随机分为5组:正常对照组(A组)、模型组(B组)、高剂量组(C组)、中剂量组(D组)、低剂量组(E组)。A组打开关节腔后不作任何处理逐层缝合手术切口,B、C、D、E四组行改良Hulth法造模,A组打开关节腔后不作任何处理逐层缝合手术切口,术后每天给予青霉素40万U/只肌肉注射,连续7天,预防感染。适应性喂养1周后,每日驱赶各组实验动物活动0.5h,2次/天,术后5周,对兔膝关节进行X线摄片证实判断造模成功。A与B组给予生理盐水2ml/ kg·d灌胃,C、D、E组分别给予600mg/kg·d、300 mg/ kg·d、150 mg/ kg·d栀子浸膏灌胃,A与B组给予生理盐水2ml/ kg·d灌胃,连续给药3周后,每组随机抽取实验动物2只,拍摄兔膝关节X线片;将全部动物处死前,分别采集关节液、血液检测IL-1β含量;对关节软骨行组织学观察、免疫组织化学法检测IL-1及Ⅱ型胶原表达情况;取滑膜行免疫组织化学法检测IL-1含量;Masson染色与甲苯胺蓝染色分别检测软骨基质中胶原和蛋白多糖含量;并对软骨细胞行透射电镜进行超微结构观察。所有数据经统计学分析处理。 结果:(1)X线片观察 A组关节无明显变化;B组关节内侧间隙明显变窄,关节面粗糙变形,关节边缘有骨赘形成,软骨下骨骨密度明显增高;C、D与E组关节退行性变化较B组轻。(2)肉眼、光镜、透射电镜观察与A组相比,B组关节软骨呈明显退行性变,退变程度重;C、D、E组关节软骨退行性变程度较B组轻;C、D、E组中C组关节软骨退变程度最轻,E组关节软骨退变程度最重,D组变化介于C与E组之间。(3)Pelletier JP及Mankin’s评分与A组相比,B组关节软骨Pelletier JP及Mankin’s评分显著升高(P< 0.05);C、D、E组关节软骨评分都较B组低(P< 0.05);C、D、E组间关节软骨评分有差异(P< 0.05)。(4)软骨基质中蛋白多糖含量 A、C、D与E组蛋白多糖含量明显高于B组(P<0.05),C、D、E组间蛋白多糖含量有差异(P< 0.05)。(5)软骨基质中胶原含量 A、C、D与E组胶原含量明显高于B组(P<0.05),C、D、E组间胶原含量有差异(P< 0.05)。(5)免疫组化SP法检测关节软骨Ⅱ型胶原 A、C、D与E组Ⅱ型胶原含量明显高于B组(P<0.05)。(66)免疫组化SP法检测关节软骨IL-1 与B组比较A、C、D与E组IL-1含量明显降低(P<0.05),C、D、E组间IL-1含量有差异(P< 0.05)。(77)免疫组化SP法检测关节滑膜IL-1 A、C、D与E组较B组滑膜IL-1含量低(P<0.05),C、D、E组间IL-1含量有差异(P< 0.05)。(88)ELISA法检测血清与关节液IL-1βA、C、D与E组血清、关节液中IL-1β含量较B组低(P<0.05),C、D、E组间IL-1β含量有差异(P< 0.05)。 结论:栀子浸膏能减轻兔膝骨关节炎模型关节软骨退行性变和滑膜炎症,从而,延缓病程的进展,其作用机理可能与下调IL-1水平,抑制滑膜炎症,调节降低软骨基质中蛋白多糖与Ⅱ型胶原的表达降解有关。
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