皮下脂肪组织位于真皮层和筋膜层之间,与内脏脂肪组织和骨髓黄色脂肪组织共同构成人体脂肪组织,其中皮下脂肪所占比例高达2/3。当人体从青年阶段进入老年阶段后,皮下脂肪贮存逐渐减少,同时弹力纤维与胶原纤维结构改变使得皮肤弹性和张力都变弱,最终导致中老年人皮肤产生下垂和凹陷皱纹。中老年人面部衰老主要是由于面部皮下脂肪组织层严重萎缩而导致面部组织坍陷的表观现象。前人对于面部研究主要集中于表观现象及组织结构变化的研究,但对于面部主要组成皮下脂肪层减少的机理研究甚少。本研究主要通过揭示女性衰老过程中面部皮下脂肪组织萎缩的调控机理以及该部位脂肪源干细胞的增殖分化能力的变化,从而为进一步了解衰老对女性面部影响并对开发研究相应抗衰老药物奠定基础。本研究获得的主要结果如下:1、通过对女性面部皮下脂肪组织石蜡切片和H&E染色,观察细胞形态并统计相同视野面积中包含的脂肪细胞数目发现,年轻组脂肪细胞显著大于年老组脂肪细胞;且年轻组含细胞数显著比年老组少(P<0.01)。实验结果表明:衰老导致女性面部皮下脂肪细胞变小。2、检测不同个体(年轻组和年老组)脂肪细胞内调控脂滴分解的相关因子(PERILIPIN、ATGL、HSL)的表达差异。通过qRT-PCR实验结果表明,年轻组PERILIPIN、ATGL的m RNA表达量极其显著高于年老组(P<0.001);虽然年老组面部皮下脂肪组织中HSL mRNA表达量有下降趋势,但差异并不显著(P=0.4238);Western Blot结果也表明,PERILIPIN、ATGL蛋白表达量在年轻组中都显著高于年老组(P<0.05)。qRT-PCR和Western Blot实验结果表明:衰老导致皮下脂肪细胞内脂滴的降解速率下降。3、检测不同个体(年轻组和老年组)脂肪细胞内调控线粒体生成及代谢相关因子(PGC-1α、COXIV)的表达差异。qRT-PCR结果显示,在年老组内,PGC-1α和COXIV的mRNA表达都显著下降(P<0.05)。Western Blot实验发现年老组PGC-1α蛋白表达量显著低于年轻组(P<0.05)。qRT-PCR和Western Blot实验结果表明:衰老导致皮下脂肪细胞内线粒体生成及代谢速率下降。4、通过EdU染色检测衰老对女性面部皮下脂肪组织来源的脂肪源干细胞增殖的影响。结果显示,相年老组比年轻组原代脂肪细胞EdU阳性率显著下降(P<0.05),实验结果表明:衰老导致女性皮下脂肪源干细胞克隆增殖能力下降。5、通过对分化后的不同个体(年轻组和年老组)脂肪源干细胞进行油红O染色,确定衰老对脂肪源干细胞成脂能力的影响。成脂诱导分化2d后,脂滴的沉积很微量,几乎无法观察得到;成脂诱导分化5d后,年老组与年轻组已经可以观察得到脂滴沉积差异,年轻组要显著高于年老组(P<0.05);当成脂诱导分化8d、10d后,年轻组仍然显著高于年老组(P<0.05);油红O染色结果表明:衰老导致人脂肪源干细胞的诱导分化后脂滴沉积能力下降。6、qRT-PCR检测不同个体(年轻组和年老组)脂肪源干细胞成脂诱导分化0d、2d、5d、8d、10d后脂肪细胞分化相关调节基因PPARG、LPL、AP2、ADIPOQ的m RNA表达量。试验结果显示,同一个体脂肪源干细胞在成脂分化过程中,PPARG、LPL、AP2、ADIPOQ的mRNA表达量在前期都极显著升高(P<0.01),但PPARG和LPL的mRNA到分化后期表达量有所下降;而不同个体(年轻组和老年组)脂肪源干细胞成脂分化相同天数时,在诱导分化前期,年轻组脂肪源干细胞的PPARG、LPL、AP2、ADIPOQ mRNA的表达量显著或极显著高于年老组(P<0.05或P<0.01);但在分化后期,年轻组与年老组的成脂分化相关调节基因PPARG、LPL、AP2、ADIPOQ的mRNA表达量之间的差异在逐渐缩短,甚至LPL、ADIPOQ的mRNA表达量在两组间无差异。试验结果表明:衰老导致脂肪源干细胞内调控成脂分化因子的表达下降,从而降低成脂分化能力。