目的:　　胶质瘤是最常见的脑内原发性的肿瘤，其发病率在所有颅内肿瘤中居第一位。其中，Ⅳ型胶质瘤的恶性程度最强。尽管目前临床上普遍开展了手术、放疗、化疗等多种治疗方法，但胶质瘤患者的预后仍然较差，其5年生存率大约10％。由于Ⅳ型胶质瘤的侵袭性很强，对现有化疗药物普遍存在耐药性，所以迫切需要更多的研究来优化治疗手段。探索胶质瘤发生、发展的新治疗靶点，可能为提高胶质瘤的临床治疗效果带来希望。有研究表明，RAS/RAF信号通路在胶质瘤的发生、发展中起到重要的作用。其中，Raf-1激酶抑制蛋白(Raf-1kinase inhibitor protein，RKIP)属于磷脂酰乙醇胺家族的一员，参与调控恶性肿瘤。有研究发现，RKIP能通过抑制Raf-1-MEK1/2-ERK1/2和NF-κB信号通路的活性，从而抵消这两条信号通路促生存、抗凋亡的作用，最终抑制肿瘤细胞的生长。过表达RKIP可以增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。然而，RKIP在胶质瘤中的作用及相关机制，目前尚不清楚。　　MicroRNA是一类长度大约为19-25个核糖核酸的小分子RNA，自从1998年在线虫上首次发现后，其表达和功能逐渐被广为关注。MicroRNA并不编码蛋白，而是通过直接结合其靶基因mRNA的3-非翻译区内的结合位点，抑制mRNA的翻译或诱导其降解，因此可在转录后水平抑制基因的表达。近年来，microRNA在恶性胶质瘤中潜在的诊断和治疗作用吸引了越来越多的关注。诸多研究表明，microRNA参与调控胶质瘤细胞的生存、凋亡、增殖、细胞周期进展、迁移、侵袭和血管生成等生物学过程。另外，胶质瘤组织和对应的癌旁组织中，microRNA表达存在明显的差异，提示microRNA有可能作为诊断胶质瘤的重要工具。最近有研究发现，microRNA-98很可能在包括前列腺癌、鳞状细胞癌、肺癌等多种恶性肿瘤的发生、发展、耐药性中发挥了重要的调控作用，然而，其在胶质瘤中的作用尚未见报道。本研究发现HMGA2是microRNA-98的靶基因。HMGA2是高迁移率蛋白家族A(high-mobility group A)的一员，能通过影响转录因子的活性参与调控肿瘤细胞的上皮间质转化，从而参与肿瘤的转移。然而，HMGA2在胶质瘤细胞中的作用尚不明确。　　本课题旨在探明RKIP在胶质瘤的转移中所发挥的作用可能与microRNA-98调控的HMGA2密切相关。首先我们收集了26例胶质瘤标本，对RKIP在胶质瘤组织中的表达进行了检测，发现其表达显著下调，提示其在胶质瘤中可能起到重要作用。之后，我们进一步研究了RKIP与microRNA-98在胶质瘤中的关系，以及microRNA-98与HMGA2的靶向关系。　　方法:　　收集26例不同级别的胶质瘤组织以及胶质瘤细胞株U251，U87，SHG44，以癌旁组织或胶质细胞HEB为对照，分别利用Real-time PCR和Western Blotting检测RKIP、microRNA-98和HMGA2在正常胶质细胞、胶质瘤细胞株和胶质瘤组织中的表达水平。　　(1)利用双荧光素酶报告系统验证microRNA-98与HMGA2的靶向调控关系。　　(2)在胶质瘤细胞U87、U251细胞中，利用慢病毒过表达RKIP，用Western Blotting验证转染效率后，利用Real-time PCR检测microRNA-98的表达水平，用Western Blotting检测HMGA2的表达水平。　　(3)在胶质瘤细胞U87、U251细胞中，过表达RKIP后，用BrdU检测U87、U251细胞增殖能力的改变。　　(4)在胶质瘤细胞U87、U251细胞中，过表达RKIP后，用Transwell检测U87、U251细胞侵袭能力的改变。　　(5)利用microRNA-98 mimic转染胶质瘤细胞U87和U251细胞，利用Real-time PCR检测转染效率;同时过表达RKIP，利用Real-timePCR检测microRNA-98的表达水平。　　(6)设置分组:对照组、过表达RKIP组、microRNA-98+RKIP共转组，用Western Blotting检测HMGA2的表达。　　(7)设置分组:对照组、过表达microRNA-98组、过表达RKIP组、microRNA-98+RKIP共转组。用BrdU检测U87、U251细胞增殖能力的改变;用Transwell检测U87、U251细胞侵袭能力的改变。　　结果:　　(1)与癌旁组织相比，胶质瘤组织中RKIP和microRNA-98的表达水平显著降低，而HMGA2的表达水平则显著升高。其中，microRNA-98和RKIP具有显著的正相关关系，而microRNA-98与HMGA2的表达呈负相关关系。　　(2)与正常胶质细胞HEB相比，胶质瘤细胞系SHG44、U251、U87中RKIP和microRNA-98的表达水平显著降低，而HMGA2的表达水平则显著升高，尤其在U251、U87细胞中差异最为明显。　　(3)双荧光素酶报告检测发现，microRNA-98可以直接结合HMGA2 mRNA的3-UTR区。　　(4)在胶质瘤细胞U87、U251细胞中，过表达RKIP后，microRNA-98的表达显著上调，而HMGA2的表达则显著降低，细胞增殖无明显改变，而侵袭能力下降。　　(5)与单独转染microRNA-98 mimic相比，共转染microRNA-98+RKIP后，U87、U251细胞中microRNA-98的表达水平进一步升高。　　(6)与单独转染RKIP相比，共转染microRNA-98+RKIP后，U87、U251细胞中HMGA2的表达进一步降低。　　(7)与单独转染RKIP或microRNA-98相比，共转染microRNA-98+RKIP后，并未显著影响U87、U251细胞的增殖水平。　　(8)与单独转染RKIP或microRNA-98相比，共转染microRNA-98+RKIP后，U87、U251细胞侵袭能力进一步减弱。　　结论:　　(1) RKIP与microRNA-98在胶质瘤组织和胶质瘤细胞系中表达显著降低。　　(2) RKIP与microRNA-98在胶质瘤组织中的表达呈正相关关系。　　(3)过表达RKIP可上调microRNA-98的表达，对细胞的增殖无明显影响，但可抑制胶质瘤细胞的转移。　　(4) HMGA2在胶质瘤组织和和胶质瘤细胞系中表达显著升高。　　(5) HMGA2与microRNA-98在胶质瘤组织中的表达呈负相关关系。　　(6) microRNA-98靶向调控HMGA2的表达。　　(7) RKIP可能通过促进microRNA-98的表达，抑制HMGA2的表达，进而抑制胶质瘤细胞的侵袭。　　(8) RKIP/microRNA-98/HMGA2通路可能作为治疗恶性胶质瘤的一个重要靶点。