天然自身抗体（natural autoantibody，NAA）是指在没有任何抗原免疫的情况下，正常机体存在的针对一种或多种自身抗原的抗体。NAA由胚系基因编码，具有IgG、IgM、IgA三种同种型，目前研究较多的是前两类。NAA对抗原表现广谱亲和力并呈现出多反应性，即每个单克隆往往可识别两种以上的自身抗原，NAA以V区介导的缔合性形成独特型-抗独特型网络，构成了免疫系统的基本组成部分，参与免疫自稳态的调节，具有非特异性防御、抗炎、肿瘤监视、协助抗原提呈等多种功能。NAA的发现，不但向经典的克隆选择学说提出了挑战，具有重要的理论意义，而且还有重要的临床意义，其质与量的变化，与许多疾病密切相关。 抗角蛋白自身抗体（anti-keratin autoantibodies，AK auto Abs）作为NAA家族的一员，亦广泛存在于人和多种动物体内，在皮肤的多种生理和病理过程中亦具有重要作用。经过多年研究，我们证实了AKanto Abs存在的普遍性并已得到纯化的AK auto Abs；通过体外试验和不同动物滴度模型初步探讨了其部分作用及机理；直接观察AK antoAbs在动物实验银屑病、接触性皮炎中的积极影响；建立了分泌抗角蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株，获得了具有较高生物活性的抗角蛋白单克隆抗体；从半合成的噬菌体抗体库中成功地筛选到抗角蛋白的噬 第四军医大学硕士学位论文菌体抗体，并初步得到人源化的抗角蛋白单克隆抗体，但对不同个体AK auto Ahs 的反应模式及在体内的发生发展过程、病理状态下的变化等方面却较少涉及。而对这些问题的探索不但可以使人们进一步深入理解AK auto Ahs在体内的生理病理作用，而且有助于我们分析它们在体内的调节及产生机制等诸多问题。 本研究试图逐一说明以上问题。首先我们自正常人手足哪氏提取角蛋白。以此作为抗原，采用ELISA及Westblot法分析正常成人、正常人不同年龄段血清中lgG和kM类AK auto Ahs的免疫活性。由于全血清反应的是一种多种因素存在下的网络效应，而纯化Ig可更好反应产生Ig的B细胞克隆情况，我们同时比较了个体血清IgG纯化前后AK ant。Ahs反应性的差别，从而分析和推测AK auto Ahs在体内的有关生物学特性。 另一方面，鉴于以前的实验己发现银屑病与 AK an t o Ah s的关系较密切，因此我们选择了银屑病以分析疾病状态下 AK au切 Ahs滴度和反应模式的变化，试图理解 AK auto Ahs在该病理状态下扮演的角色。 人血清 AK auto Ahs是一组针对不同分子量角蛋白的多克隆抗体群，在采用兔疫印迹方法比较分析了人血清 AK auto Ahs对角蛋白的反应特性时，我们强调的是整体反应特征，即不单关注哪一种角蛋白成分被识别，更重要的是血清的反应模式，即识别角蛋白区带数。位置以及对同一区带的反应强度。我们把这种AK auto Ahs对一组不同分子量角蛋白的反应特性称为AK auto Ahs的整体反应模式。 角蛋白是一组分子量 40 000－70 000 Mr 的中性缓冲不溶解多肽，是表皮组织的特征，其含量随表皮基底层向终末分化逐渐升高，从人手足姘眶提取的角蛋白经SDS－PAGE后，在电泳凝胶显示有7条 －4－ 第四军医大学硕士学位论文多肽成分，Mr约在42 000－63 000Mr之间，含有表皮角蛋白组分的大部分．由于其提取方便，纯度高，成分多，一定程度上可代替表皮全角蛋白来进行研究。 不同个体血清IgG类AK auto Ahs的反应模式高度异质，几乎无两个完全相同的个体，即具有个体特异性。为便子比较，我们将肉眼大体相似的归为一种模式，大致可分为4种主要的反应模式。血清IgM类AK auO Ahs的反应模式在不同个体之间差异较IsGJ＼。可大体分为3种模式。 血清纯化 lgG 中 AK au扣 Ahs 滴度较纯化前明显升高，Westernblot显示识别条带增加，反应性增强，且个体之间模式趋于一致；说明血清中 lgG AK auto Ahs的反应性受至一些非 工sG因素不同程度地掩盖或调节。结合有关文献，我们认为自身反应性IgM在其中起主要调节作用。由于纯化IgG能更好的反应产生AK au北Ahs B细胞克隆的特性，个体模式的一致，提示AK auto Ahs的产生具有保守性，与外来抗原和个体免疫接触史关系不密切。 脐带血IgM类和IgG类AK au刊 Ahs滴度均明显低于其他年龄段（P＜0，05），而幼儿（工～2岁）、成年人和老年人（＞70）之间 lgM类和IgG类 AK auto Ahs滴度无明显差异（P＞0．05）。脐带血 lgM 类 AK autoAh S 反应模式识别条带少，反应强度低，明显有别于其它三组；Westernblot显示幼儿、成年人、老年人血清中两种类型 AK auto Ahs均无明显差异，且三个年龄段纯化IgG中AK auto Ahs反应模式基本一致。基于以上结果，可以认为：出生时AK SStO AbS即存在，但水平较低，幼年期AK auto AbS的水平迅速增加，以后各年龄段基本保持稳定。这种现象产生的机制尚不很清楚，但显然?