严重急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)由SARS-CoV引起，是一种主要通过近距离空气飞沫和密切接触传播的呼吸道传染病，其起病急、传播快、病死率高达5%～10%。截至2003年8月5日，29个国家报告临床诊断病例8422例，死亡916例，其中我国大陆累计出现病例5327个，死亡349人。SARS之所以造成如此严重的的后果，主要是因为SARS是新发病，人们对SARS的流行规律认识不清，而且缺乏有效的诊断治疗手段。虽然目前SARS已得到有效控制，但由于SARS-CoV来源不清，而且人群普遍易感，因此SARS在人类再次出现的可能性很大。SARS防治仍是一项复杂、长期、艰巨的任务。本文对SARS-CoV结构蛋白血清IgG抗体的变化规律和恢复期SARS患者排毒规律进行了检测，以便为SARS的诊断和控制提供线索和依据。现将主要研究内容和结果总结如下：SARS-CoV结构蛋白基因克隆与原核表达将分离的SARS-CoV HT-1株接种Vero E6细胞，待细胞病变后，收集细胞，提取总RNA，参照已发表的SARS-CoV的全基因组序列，设计引物，通过RT-PCR扩增四种结构蛋白的编码基因（其中S蛋白分三段表达），并将其克隆到中间载体pCDNAII，鉴定正确后，将目的片段插入表达载体，转化大肠杆菌BL21，37℃振荡培养，IPTG诱导表达，离心收菌后行SDS-PAGE，显示四种结构蛋白都得到很好表达。Western blot分析显示：表达的蛋白均可与融合蛋白的抗体特异性结合，说明SARS-CoV四种结构蛋白均得到正确表达。二、SARS患者结构蛋白的血清IgG抗体变化规律应用表达的四种结构蛋白与恢复期SARS患者血清反应，结果恢复期血清中可检测到抗N蛋白和S蛋白的IgG抗体，而没有检测到抗E蛋白和<WP=5>M蛋白的IgG抗体。因此我们连续收集11位SARS患者的54份血清，应用Western blot方法，分析了针对N蛋白和截短形S蛋白（S1,S2,S3）的IgG抗体变化规律。检测结果显示：有些患者在患病第7天即可检测到抗S1蛋白、S3蛋白和N蛋白IgG抗体，抗S2 IgG抗体最早在患病第9天可检测到，而且随着患病日期的延长检出率逐渐增加，患病后期抗N蛋白抗体（第15天）和抗S3蛋白抗体（第19天）检出率可达到100%；三段S蛋白的抗原性强弱不同，血清IgG抗体检出率也存在差异，SARS患者血清中S3蛋白的IgG抗体检出率最高，S1次之，S2最低，但是也有个体差异，个别病人产生的抗S2 IgG抗体强于其它两段蛋白，可能是由于不同病人的免疫反应性不同和S蛋白基因变异引起。三、SARS恢复期患者排毒监测从流行病学角度讲，对恢复期或无症状的患者进行定时监测，及时了解其带毒状况，对预防和控制疾病的传播有重大意义。RT-PCR可特异地检测SARS病毒的RNA片段,适用于各种临床标本,如血液、粪便、呼吸道分泌物及其他身体组织。我们连续收集23位恢复期（病程≥21天）病人配对的血、痰、便、尿标本各69份。根据GenBank公布的SARS-CoV基因序列，选择编码N蛋白的开放性读码框，并与已知的冠状病毒的基因序列做比较，设计SARS-CoV特异性的引物，应用逆转录巢式PCR的方法检测SARS-CoV特异性核酸。结果在4位患者的粪便标本和2位患者的痰标本中检测到特异性RNA。说明恢复期患者可能通过粪便和痰液排毒，存在一定的传染可能性。通过以上实验，我们了解到SARS-CoV四种结构蛋白的特异性IgG抗体的变化规律，为SARS的血清学诊断和SARS-CoV致病机制研究提供可靠的依据和有益的线索；通过检测恢复期患者的排毒情况，我们对恢复期病人的感染性有一定的了解，为全面认识SARS-CoV流行规律提供有益的帮助。