论文部分内容阅读
研究目的:研究IFIT2在姜黄素抗白血病中的作用,为姜黄素或联合干扰素治疗白血病提供实验和理论依据。研究方法:分别利用四甲基偶氮唑(MTT)比色法、Annexin V/PI染色法、PI单染法检测不同浓度姜黄素对白血病细胞增殖、凋亡、周期的影响;利用基因芯片技术检测姜黄素处理前后U937基因变化情况;RT-PCR、蛋白质印迹法(Western Blot)检测m-RNA及蛋白质的变化情况;慢病毒转染技术在细胞系中抑制和过表达IFIT2。研究结果:1、姜黄素处理白血病细胞系(NB4、NB4-R1、U937、K562、HL60)24h后,各细胞系IC50值如下:U937:8.63±2.34μmol/L;K562:27.67±2.72μmol/L;NB4:15.77±2.17μmol/L;NB4-R1:16.67±1.63μmol/L;HL60:27.86±2.45μmol/L。2、用浓度为0、5、10μmol/L的姜黄素对U937处理24h后,细胞凋亡比例分别为4.2±1.44%、21.9±3.64%、33.4±4.74%;用浓度为0、5、10μmol/L的姜黄素对K562处理24h后,细胞凋亡比例分别为8.2±2.2%、6.9±1.9%、8.8±2.1%。3、用不同浓度的姜黄素对U937处理24h后,与空白对照相比(0μmol/L),凋亡蛋白PARP、活化型caspase3表达明显增高,且与浓度成正比,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达则随着姜黄素浓度的增加而降低。而用不同浓度的姜黄素对K562处理24h后,与空白对照相比(0μmol/L),凋亡蛋白PARP、活化型caspase3和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达均无明显变化。4、用不同浓度的姜黄素处理U937细胞24h后,随着姜黄素浓度的增加,细胞在G0/G1期的比例逐渐减少,而在G2/M期的比例则逐渐增高;用不同浓度的姜黄素处理K562细胞24h后,S期细胞所占比例随着浓度增加而逐渐减少,G2/M期细胞所占比例随着药物浓度增加略有升高。5、通过基因表达芯片分析姜黄素处理前后U937细胞基因表达变化情况,发现IFIT家族基因IFIT1,IFIT2,IFIT3在姜黄素处理U937细胞24h后明显升高,其中以IFIT2升高的最为明显,而K562中无此变化。6、10μmol/L姜黄素处理过表达IFIT2的K562细胞24h,其凋亡细胞所占比例高于空白组和阴性对照组。7、慢病毒转染抑制U937中IFIT2的表达,检测姜黄素诱导其凋亡的能力,其凋亡细胞所占比例低于阴性对照组。8、姜黄素(10μmol/L)联合干扰素(5000u/ml)处理K562细胞24h,空白组细胞凋亡比例为8.2±1.25%,单用姜黄素处理组凋亡细胞所占比例为12.1±1.32%,单用干扰素γ处理组凋亡细胞所占比例为18.1±1.42%,干扰素γ联合姜黄素处理组凋亡细胞所占比例为34.8±3.1%。研究结论:1、不同白血病细胞系对姜黄素敏感性不同,其中U937对姜黄素最敏感,NB4、NB4-R1次之,K562、HL60最差。2、姜黄素可诱导白血病细胞凋亡;3、姜黄素可将细胞阻滞在G2/M期;4、IFIT2可增强姜黄素诱导的凋亡作用。5、干扰素与姜黄素联用具有协同作用。