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结核病是威胁人类健康的重大传染性疾病,近年来,我国结核病的形势依然严峻。大规模GWAS研究显示ASAP1多态性与结核病的易感性相关,临床样品检测表明具有特定ASAP1多态性的活动性结核患者的ASAP1表达水平低于健康对照,但目前尚未有ASAP1表达水平影响结核病易感性的实验研究报道。本文以THP-1单核细胞系分化的巨噬细胞作为细胞模型,研究不同ASAP1表达水平的巨噬细胞对结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis,Mtb)感染和免疫应答的差异,包括分析巨噬细胞对细菌吞噬、杀伤、细胞炎性反应的差异,同时检测细胞自噬情况的差异,探究ASAP1对结核分枝杆菌感染的巨噬细胞免疫反应的影响。具体研究结果如下:1.ASAP1参与巨噬细胞对结核分枝杆菌弱毒株(Mtb H37Ra)的免疫反应THP-1细胞是人外周血单核细胞系,经PMA诱导之后,分化为巨噬细胞,分化后细胞形态发生变化,同时ASAP1表达上调,表明ASAP1参与巨噬细胞形态的变化。巨噬细胞经Mtb H37Ra感染后,ASAP1表达上调,表明ASAP1存在与Mtb H37Ra感染巨噬细胞相关性。2.ASAP1过表达和敲低巨噬细胞的建立利用慢病毒表达系统,构立了ASAP1过表达THP-1细胞系,经PMA诱导,即成为ASAP1过表达巨噬细胞;THP-1细胞利用ASAP1特异si RNA,同时经PMA诱导,建立了ASAP1敲低巨噬细胞。蛋白免疫印迹结果、荧光定量PCR结果均证实获得ASAP1过表达以及ASAP1敲低巨噬细胞。利用细胞模型研究ASAP1表达水平影响巨噬细胞对Mtb感染应答的研究。3.ASAP1对巨噬细胞吞噬、杀伤Mtb H37Ra的影响以相同MOI分别感染不同ASAP1表达的巨噬细胞24 h,通过菌落计数判断细菌被吞噬数量。实验表明,低水平表达ASAP1的巨噬细胞对细菌的吞噬能力减弱,高水平表达ASAP1的巨噬细胞对细菌的吞噬能力显著增强。应用荧光定量PCR检测几种细胞炎性因子的表达,表明ASAP1低表达及高表达巨噬细胞的炎性因子表达水平降低,抗炎性因子表达升高。延长感染时间,发现高ASAP1表达巨噬细胞对细菌的杀伤力减弱。说明ASAP1高表达有利于巨噬细胞对细菌吞噬,但过量细菌的吞噬抑制了巨噬细胞的其它免疫能力。4.ASAP1表达水平对巨噬细胞感染Mtb后自噬情况的影响Mtb H37Ra感染不同ASAP1表达水平的巨噬细胞后,LC3及P62的蛋白免疫印迹结果显示ASAP1过表达巨噬细胞自噬被明显抑制,ASAP1敲低巨噬细胞自噬没有显著变化。AKT及磷酸化AKT;m TOR及磷酸化m TOR的蛋白免疫印迹结果显示,ASAP1对巨噬细胞感染Mtb后自噬的影响,是通过激活AKT-m TOR信号通路发生的。以上研究表明ASAP1异常表达不利于巨噬细胞对Mtb的免疫反应,导致机体免疫系统不能有效控制结核分枝杆菌的发展,这可能是ASAP1多态性影响结核病易感性的机制。