【摘 要】
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背景食管癌是一种常见的恶性肿瘤,5年生存率低,亟需改进治疗方式以提高患者生存率。干细胞基因表达调控网络中转录因子（Transcription factors,TFs）的调控可能与肿瘤进展和肿瘤干细胞生物学有关。性别决定区Y框蛋白1（Sex determining region Y-box1,SOX1）是一种转录因子,在多种恶性肿瘤中表达并与临床病理密切相关,有望成为肿瘤诊断治疗的靶点。SOX1与食
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背景食管癌是一种常见的恶性肿瘤,5年生存率低,亟需改进治疗方式以提高患者生存率。干细胞基因表达调控网络中转录因子（Transcription factors,TFs）的调控可能与肿瘤进展和肿瘤干细胞生物学有关。性别决定区Y框蛋白1（Sex determining region Y-box1,SOX1）是一种转录因子,在多种恶性肿瘤中表达并与临床病理密切相关,有望成为肿瘤诊断治疗的靶点。SOX1与食管癌发生发展的研究较少且机制不清,本研究主要探讨SOX1对食管癌细胞增殖和侵袭的影响,分析其与Wnt信号通路相关的作用机制,为食管癌防治提供参考。目的（1）在食管癌细胞中过表达SOX1基因,研究其对肿瘤细胞增殖、克隆形成、迁移及凋亡的影响。（2）检测分析SOX1基因过表达对Wnt/β-Catenin信号通路的影响,初步研究SOX1对食管癌的作用机制。方法（1）SOX1过表达载体构建及食管癌细胞转染。查找并合成SOX1基因m RNA序列,构建过表达载体GV658,分别转染至ECA109和EC9706细胞中。（2）SOX1过表达对食管癌细胞生长增殖影响。q PCR检测SOX1基因m RNA表达。细胞增殖实验通过MTT、结晶紫染色和划痕实验进行检测,根据酶标仪测量的OD值绘制增殖曲线。（3）SOX1过表达对食管癌细胞克隆形成、迁移及凋亡的影响。根据克隆的数量及大小判断克隆形成的能力。观察6孔板中划痕的细胞融合度,分析细胞的迁移能力。荧光显微镜观察Hochest 33342染色后细胞核的变化,分析凋亡的发生。（4）SOX1过表达对食管癌细胞作用机制研究。为了进一步探讨SOX1作为肿瘤抑制因子的作用机制,我们分析了SOX1基因过表达对于Wnt/β-Catenin信号通路的影响,通过Western Blot检测SOX1过表达对Wnt/β-Catenin相关蛋白的影响。结果（1）将构建的SOX1过表达载体转染食管癌细胞,通过绿色荧光观察到较高的转染效率。q PCR检测表明:转染SOX1过表达载体的食管癌细胞组（SOX1-OE组）中SOX1基因的表达显著高于对照组,表明成功建立SOX1-OE食管癌细胞株（P＜0.01）。（2）细胞增殖实验表明SOX1过表达组转染后OD值显著降低,说明SOX1-OE组的抑制率增高,对食管癌细胞增殖产生明显的抑制作用。（3）荧光显微镜下观察SOX1-OE组的细胞核相对对照组变小,部分呈现出明显的皱缩形态。（4）Western blot结果提示SOX1-OE使Wnt信号通路相关基因β-Catenin、Cyclin D1、c-Myc蛋白表达明显下降,GSK-3β上调。结论SOX1的过表达可显著抑制食管癌细胞的增殖,导致细胞的克隆形成和迁移能力明显下降,同时能够诱导细胞凋亡的发生,其分子作用机制可能与Wnt/β-Catenin信号通路的调控密切相关。
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