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背景:在世界恶性肿瘤发病率统计中,食管癌的发病率排在第九位。在中国,食管癌死亡率在所有类型癌症的排名第五,其病理类型以食管鳞癌(ESCC)为主。然而,尽管医疗诊断水平不断在提高,大多数ESCC患者在初始诊断时已发展为晚期淋巴结或脏器转移,因此ESCC患者的五年总生存率非常低。尽管在过去30年里研究者们不断深入研究ESCC的诊断和治疗手段,但其极低的生存率仍然是目前胃肠病学领域最大的挑战之一。因此,针对ESCC细胞增殖和转移的分子机制研究,寻找潜在的诊断标志物和治疗靶点具有十分重大的临床意义,可能有助于改善ESCC患者不良的预后。长链非编码 RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是一组长度大于 200bps不具备编码功能的RNA,在生物过程中起着非常突出的作用。而在各种肿瘤增殖凋亡和侵袭转移过程中,lncRNA也发挥了其基础调节作用。例如,有研究证实IncRNA HNF1A-AS1可调节肺癌的增殖能力。在胃癌中,下调的lncRNA 00152在细胞迁移过程中起到抑制作用。亦有研究发现lncRNA HOTAIR与ESCC的转移和不良临床结果有着密切关系。最近新发现的lncRNA RP11-766N7.4,位于12q14.3区域的反向链上,长447bps。它在肺癌等多种肿瘤中异常表达,但在ESCC中所扮演的角色尚未有研究去探索。本研究旨在研究lncRNA RP11-766N7.4在ESCC中的生物学功能以及其中可能的分子机制。目的:检测ESCC组织和相应的同源癌旁食管组织中的RP11-766N7.4表达水平,探讨lncRNA RP11-766N7.4在ESCC中作用的分子机制,并初步探讨其作为潜在的治疗靶点的可能性。方法:1、2009年和2012年间,收集了 50例在江苏省人民医院接受食管癌根治术的ESCC患者的肿瘤样本及其相邻癌旁组织样本。排除术前接受过放疗以及化疗的患者。利用Trizol试剂从组织提取RNA总量。根据ABI 7900快速实时PCR系统(ABI,USA)操作指南,我们用qRT-PCR检测RP11-766N7.4的表达。2、使用Lipofectamine 2000,用适量RP11-766N7.4靶向的小干扰RNA或携带有RP11-766N7.4的慢病毒载体转染细胞。将ESCC细胞接种到96孔板中,通过细胞计数试剂盒-8(CCK8)测定法评估细胞活力。用细胞凋亡检测试剂盒检测转染细胞的凋亡数。并且用周期试剂盒检测转染细胞的周期分布。使用划痕试验和transwell实验测定细胞在转染后迁移和侵袭能力的变化。3、用定量PCR和Western blot检测转染后细胞株中相应EMT标志物(E-cadherin,N-cadherin和Vimentin)mRNA和蛋白质的表达水平的变化。结果:1,qRT-PCR检测结果显示,ESCC组织中RP11-766N7.4表达量明显比癌旁组织少。通过结合临床资料分析发现:RP11-766N7.4低表达量组肿瘤分期更晚,更倾向于发生淋巴结转移。没有充分的证据证实RP11-766N7.4表达水平与其他因素相关,如性别、年龄、肿瘤位置等。此外,Kaplan-Meier生存分析显示:在RP11-766N7.4高表达组,患者术后五年总生存率较高,提示着更好的预后。2,本研究在Eca-109和Te-13细胞中,分别利用siRNA干扰RP11-766N7.4和慢病毒载体构建RP11-766N7.4过表达细胞系来探究RP11-766N7.4在ESCC中的作用。CCK8测定显示RP11-766N7.4上调或下调对Eca-109和Te-13细胞系的增殖能力没有显着影响。在研究RP11-766N7.4对细胞周期和细胞凋亡影响的实验中,没有发现RP11-766N7.4对其有明显的作用。划痕试验和Transwell测定结果显示RP11-766N7.4的敲除增强了 ESCC细胞的迁移和侵袭能力。相反,上调的RP11-766N7.4可抑制Eca-109和TE-13的细胞迁移和侵袭。以上结果表明,RP11-766N7.4可抑制ESCC的转移,与上述RP11-766N7.4表达水平与淋巴结转移相关的结果一致。3,qRT-PCR和Western blot检测转染前后ESCC细胞相关EMT标记物的表达量的变化。结果表明,RP11-766N7.4敲除可在mRNA和蛋白水平同时诱导N-cadherin和Vimentin表达上调并抑制E-cadherin的表达;RP11-766N7.4过表达可在mRNA和蛋白水平同时诱导N-cadherin和Vimentin表达下调并上调E-cadherin。简而言之,在ESCC细胞系中,通过抑制RP11-766N7.4可以诱导ESCC细胞EMT过程。结论:综上所述可知,RP11-766N7.4在ESCC组织和ESCC细胞中低表达,其表达水平与ESCC分期和局部淋巴结转移负相关,敲除ESCC细胞Eca-1 09和TE-13中RP11-766N7.4后,细胞增殖和侵袭能力增强。通过对其可能的分子机制探讨发现:RP11-766N7.4在细胞水平改变ESCC生物学行为可能是通过调控EMT进程而实现的。本研究结果表明lncRNARP11-766N7.4可抑制ESCC的发生发展,具有潜在的预后评估作用和治疗靶点作用。