目的：　　 构建IL-18-EGFc融合基因并将其与表达载体pET12a(+)连接，转化E.coliRosetta(DE3)，经IPTG诱导后，表达产物经分子凝胶层析S-100纯化、离子交换层析DEAE-SFF纯化复性后得到具有生物学活性的IL-18-EGFc蛋白，并研究了针对表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR)高表达的人表皮癌A431的荷瘤小鼠体内抗肿瘤效应。　　 方法：　　 1．IL-18-EGFc原核表达载体的构建和表达前期构建的pET32a(+)-EGFc-IL-18质粒作为模板，设计引物分别扩增EGFc端序列和IL-18序列，然后以上述PCR产物为模板扩增IL-18-EGFc全长序列，目的基因经酶切后与原核表达载体pET12a(+)连接，构建新型表达载体pET12a(+)-IL-18-EGFc，经限制性内切酶鉴定和测序确定序列正确。转化E.coliRosetta(DE3)，以0.5mmol终浓度IPTG诱导表达，SDS-PAGE电泳分析表达情况和Westernblot鉴定。　　 2．IL-18-EGFc的纯化复性及体外生物学测定表达产物主要以包涵体形式表达，将包涵体洗涤后溶于8M尿素中，经分子凝胶层析S-100纯化、离子交换层析DEAE-SFF纯化复性后，体外刺激人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞(NK-92MI)，以IFN-γELISA试剂盒检测IFN-γ的表达情况。　　 3．IL-18-EGFc的体内生物学鉴定收集足够量的人表皮癌A431细胞，构建人表皮癌A431Balb/c荷瘤小鼠肿瘤模型，随机分成三个治疗组：IL-18-EGFc组、IL-18组和NS组，结合经放射线处理的NK-92MI细胞共同进行瘤周注射治疗。IL-18-EGFc组治疗浓度为25ug/只；IL-18组治疗浓度为1ug/只；NS组治疗浓度为0.1ml/只。监测肿瘤生长曲线；治疗结束后，应用流式细胞术进行细胞凋亡和周期的检测，同时进行病理组织切片的观察。　　 结果：　　 1．成功构建pET12a(+)-IL-18-EGFc原核表达载体并诱导表达目的蛋白经限制性酶切鉴定及测序分析表明原核表达载体pET12a(+)-IL-18-EGFc与设计相符；经IPTG诱导后能在工程菌EcoliRosetta(DE3)中高效表达，目的条带分子量大小为21kDa，且目的条带能被IL-18mAb特异性识别。　　 2．成功纯化复性得到具有生物学活性的IL-18-EGFc蛋白目的蛋白经分子凝胶层析S-100纯化、离子交换层析DEAE-SFF纯化复性后，得到纯度95％的目的蛋白，刺激NK-92MI细胞，能够产生IFN-γ，并具有剂量依赖性。　　 3．IL-18-EGFc蛋白具有显著的体内抗肿瘤效应。相对于对照组生理盐水和rhIL-18，IL-18-EGFc组的抑瘤率达到69.0％，显著高于对照组；肿瘤凋亡结果显示IL-18-EGFc组、IL-18组和NS组凋亡率分别为59.27±1.87％(P＜0.01，相对于NS组)，36.32±1.08％(P＜0.05，相对于NS组)和19.44±1.02％。IL-18-EGFc组和rhIL-18组也存在统计学差异(P＜0.05)。IL-18-EGFc组细胞周期明显被阻滞在G1期(P＜0.05，相对于NS组)，S期细胞减少(P＜0.05，相对于NS组)。病理切片观察也提示了凋亡坏死情况的增加。　　 结论：　　 成功构建了原核表达载体pET12a(+)-IL-18-EGFc，并成功表达IL-18-EGFc目的蛋白，经纯化复性后，目的蛋白具有体内体外的抗肿瘤生物学活性。