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摘要：目的观察酸性鞘磷脂酶(ASM)在二氧化硅(Si02)致小鼠胚肺成纤维细胞(NIH3T3)纤维化过程中的变化及规律,探讨ASM在Si02致肺纤维化体外模型中的作用。方法ACP染色法检测小鼠原代巨噬细胞(PAM)细胞纯度；鸡红细胞吞噬实验测定PAM和小鼠胚胎巨噬细胞(RAW.264.7)的吞噬功能；收集SiO2刺激RAW.264.7和PAM细胞培养上清,ELISA法测定其IL-8、TNF-α及TGF-β1的分泌情况；SiO2采用三种方式对NIH3T3进行染毒：(1)SiO2直接刺激组,200mg/LSiO2粉尘直接刺激NIH3T3(2) SiO2间接刺激组,收集200mg/LSiO2粉尘刺激PAM12h的培养上清再刺激NIH3T3(3) ASM抑制剂组,在间接刺激组的基础上加入ASM抑制剂。按上述三种刺激方式6,12,18,24,36和48h后收集细胞样品。高效液相色谱法测定NIH3T3细胞内的ASM活性；消化法测定细胞内羟脯氨酸(HYP)含量；Van Gieson胶原纤维染色法对NIH3T3细胞内胶原纤维进行染色；Western印迹法测定细胞内胶原Ⅲ的表达。结果PAM细胞吞噬功能及分泌白细胞介素8(IL-8)及转化生长因子β1(TGF-β1)活性较RAW.264.7高；SiO2刺激PAM12h,培养上清中IL-8. TGF-β1及肿瘤坏死因子.-α (TNF-α)的分泌中明显增加(P<0.01)；直接刺激组中,NIH3T3细胞内ASM活性在36h明显增加而其他时间点无变化,HYP含量在48h明显增加而其他时间点无变化,胶原染色在36h及48h可见红染的胶原纤维但其他时间点无变化,胶原Ⅲ表达在各个时间点表达变化均不明显；间接刺激组中,随着PAM上清作用时间延长,NIH3T3细胞内ASM活性、HYP含量、胶原Ⅲ表达均呈升高的趋势,胶原纤维染色随着PAM上清作用时间延长红染的胶原纤维也越多。ASM抑制剂组中,随着PAM上清作用时间延长,NIH3T3细胞内ASM活性、HYP含量、胶原Ⅲ表达均降低,胶原纤维染色无明显变化。结论本实验条件下,ASM在SiO2致肺纤维化的形成中有重要作用,抑制ASM活性可以有效抑制NIH3T3细胞纤维化的形成。图11幅,表6个,参考文献65篇