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目的:以P38MAPK/PGC-1通路为切入点,研究保元解毒汤改善癌因性肌肉萎缩的线粒体机制。寻找其干预肌肉萎缩的作用靶点,为研制干预癌因性肌肉萎缩有效中药提供实验依据。方法:1采用HPLC方法,检测不同批次保元解毒汤中活性成分绿原酸、阿魏酸和乌头碱含量,评价保元解毒汤水煎液的稳定性;建立C26移植瘤癌性恶病质模型,保元解毒汤干预10 d后,观察动物一般情况及体重变化,腓肠肌称重并进行HE染色,评价保元解毒汤对肌肉萎缩的干预情况;RT-PCR和WB法检测P38MAPK、PGC-1α、Atrogin-1和MuRF-1 mRNA及蛋白变化,探讨保元解毒汤干预恶病质模型小鼠肌肉萎缩的作用机制;2癌因性肌管萎缩模型建立和评价。提取Lewis细胞上清液制备条件培养基,并分别用1:2,1:4,1:8剂量诱导C2C12细胞96 h,普通倒置显微镜动态观察C2C12细胞肌管变化,ELISA法检测TNF-α和IL-6含量变化,RT-PCR和WB法检测Atrogin-1和MuRF-1mRNA和蛋白表达,构建癌因性肌管萎缩模型并进行评价;3保元解毒汤改善癌因性肌管萎缩作用及机制研究:3.1保元解毒汤水煎液与条件培养基分别按1:8、1:16、1:32比例加入培养体系干预癌因性肌管萎缩模型,持续72 h。普通倒置显微镜动态观察C2C12细胞肌管变化;ELISA法检测TNF-α和IL-6含量变化;RT-PCR和WB法检测肌管分化标志物Myf6、MyoD和MYH3及肌管萎缩蛋白Atrogin-1、MuRF-1表达情况,评价保元解毒汤对癌因性肌管萎缩模型的作用,同时寻找改善肌管萎缩的最佳浓度;3.2用保元解毒汤、P38MAPK拮抗剂、PGC-1α激动剂分别干预癌因性肌管萎缩模型72 h,普通倒置显微镜动态观察C2C12细胞肌管变化,检测P38MAPK、PGC-1αmRNA及蛋白变化,评价保元解毒汤对P38MAPK/PGC-1α通路影响;3.3荧光显微镜观察线粒体NAO染色,观察保元解毒汤对线粒体数量的影响;检测mtDNA拷贝数、采用RT-PCR、Western blot检测NRF1、TFAM mRNA和蛋白表达情况,观察保元解毒汤对线粒体生成的影响;生化法检测ATP酶活性、RT-PCR检测ATP合成酶β亚基mRNA表达变化,采用RT-PCR、Western blot检测COXIV、Cytochrome C mRNA和蛋白表达水平,评价保元解毒汤对线粒体氧化磷酸化功能的影响;探讨保元解毒汤通过P38MAPK/PGC-1通路调控线粒体氧化磷酸化功能,改善癌因性肌管萎缩的机制。结果:1 HPLC成分分析发现,三个批次保元解毒汤中绿原酸含量约114.3~114.5 ug/mL;阿魏酸含量约65.89~66.01 ug/mL;乌头碱含量约14.60~14.76 ug/mL,不同批次制备保元解毒汤质量稳定;与模型组比较,保元解毒汤能减缓动物体质量下降(P<0.05),增加腓肠肌重量(P<0.05)、使肌纤维横径变粗;且明显抑制C26恶病质模型小鼠P38MAPK/PGC-1α通路蛋白表达(P<0.05),明显抑制E3泛素连接酶Atrogin-1和MuRF-1表达(P<0.05);2成功建立癌因性肌管萎缩模型。不同浓度Lewis肺腺癌细胞上清液诱导后,C2C12细胞肌管萌发延迟且数量明显减少,肌管横径明显变细,与作用时间和浓度呈现正相关,且随作用时间,各组间C2C12细胞肌管横径差异有统计学意义(P<0.05),最佳作用时间96 h,最佳LCM干预浓度为1:2;3保元解毒汤可通过P38MAPK/PGC-1通路,改善线粒体功能,缓解癌因性肌管萎缩:3.1不同浓度浓度保元解毒汤均使肌管横径增加,与作用时间和药物浓度呈现正相关(P<0.05)。1:8浓度干预72 h效果最好;1:8保元解毒汤干预后,与模型组比较,细胞因子含量下降,MuRF-1、Atrogin-1 mRNA及其蛋白表达均明显降低(P<0.05);MyoD、Myf6和MYH3 mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05);3.2与模型组比较,保元解毒汤能抑制P38MAPKmRNA表达和蛋白质磷酸化,促进PGC-1αmRNA及其蛋白质表达,差异有统计学意义(P<0.05);3.3与模型组比较,保元解毒汤可明显增加C2C12细胞内线粒体数量、增加mtDNA拷贝数(P<0.05)、促进线粒体生物合成关键蛋白NRF1、TFAM的表达(P<0.05);同时明显促进ATP合成酶β亚基mRNA表达(P<0.05),明显上调ATP酶活性,明显促进COXIV和Cytc表达(P<0.05),改善线粒体氧化磷酸化功能。结论:体内实验表明,保元解毒汤能通过抑制P38MAPK/PGC-1通路,抑制肌肉萎缩蛋白表达而缓解肌肉萎缩的发生;体外研究表明,保元解毒汤改善癌因性肌肉萎缩的机制可能与降低细胞因子表达,抑制P38MAPK/PGC-1通路,促进线粒体生成,改善线粒体氧化磷酸化功能有关。