乳酸菌(Lactic aicd bacteria)可代谢产生有机酸及其他小分子使其具有抗菌活性,有益于宿主肠道健康。由本实验室筛选并保存的干酪乳杆菌(L.casei)已测定其总酸产量,为进一步了解其代谢产有机酸的种类及含量,本文通过优化色谱条件建立有机酸的测定方法。并研究脱落酸对保加利亚乳杆菌(L bulgaricus CICC 6047)的生长、产酸的影响;通过构建表达增强型绿色荧光蛋白的质粒标记乳酸菌,为今后进行乳酸菌对宿主肠道的益生作用的研究提供参考,其研究结果如下:(1)以Aminex HPX-87H为分析柱,考查柱温、流动相流速、流动相组分对甲酸、乙酸、丙酸、乳酸、正丁酸、琥珀酸、柠檬酸、丙酮酸、异丁酸9种有机酸分离效果的影响,建立了有机酸的测定方法。即柱温50℃,流动相流速0.6 mL/min,流动相组分为3.5 m mol/L硫酸与乙腈比例(V/V)99:1。9种有机酸标准曲线的相关系数为0.99982～0.99999该分析方法的回收率为97.28%～107.33%,精密度为0.47%～2.07%。检测8株乳酸菌类菌株发酵产有机酸的能力,表明8株菌株均产生乳酸、丙酮酸,均不产生柠檬酸、琥珀酸、异丁酸。L.casei随菌体生长不断有乳酸、丙酸产生,在该菌生长进入稳定期后期,其产生乳酸、丙酸的速率呈现一个新的增加趋势。(2)通过添加不同浓度的脱落酸分析其对L.bulgaricus CICC 6047生长和产酸的影响。表明,较低浓度的脱落酸对L.bulgaricus CICC 6047的生长及产酸的抑制作用不明显,但当脱落酸浓度达到132μg/mL时,其能抑制该菌的生长,菌株产酸能力有所下降,致使发酵液pH值较对照组偏高。同时脱落酸使该菌产乳酸、甲酸、丙酸的能力下降,但能积累更多的丙酮酸。(3)采用质粒pEGFP-N1为模板,PCR扩增egfp基因,PstⅠHF酶与Hind Ⅲ HF酶双酶切载体pMG36e及PCR产物,并利用T4DNA连接酶连接,连接产物采用热激法转化至E.coli DH5α中,通过红霉素平板筛选并验证得到阳性转化子E.coli DH5α/pMG36e-egfp。将重组质粒 pMG36e-egfp电穿孔至 L.bulgaricus CICC 6047、L lac.tis JW 18中,采用红霉素抗性平板筛选并验证得到乳酸菌阳性转化子。表明,基因egfp已经成功连接至质粒pMG36e得到重组质粒pMG36e-egfp,筛选得到转化子E.coli DH5α/pMG36e-egfp、L.bulgaricus CICC 6047/pMG36e-egfp、L.lactis JW 18/PMG36e-egfp中,这三种阳性转化子均能表达出增强型绿色荧光蛋白,激发出绿色荧光。