抑制植物RNA沉默的稻瘟病菌效应因子的筛选及功能研究

来源 :山西师范大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:liongliong517
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全球范围内种植水稻的地区,由稻瘟菌引起的水稻稻瘟病是水稻生产上最严重的真菌性病害。稻瘟菌与水稻之间是典型的互作关系,是分子植物病理学中研究植物与病原生物互作的重要模式系统之一。在自然选择过程中,植物逐渐进化出适应性免疫系统,来抵御病原生物的入侵。其中RNA沉默是植物的主要抗病防御机制之一,为了应对植物的这种抗病机制,许多植物病原菌均进化出了可以抵消、减弱甚至避免这种防御反应的能力。效应因子是病原菌侵入寄主植物后产生的一种分泌蛋白,在侵入位点分散到植物细胞中,迅速与其相应的受体相互作用,调控寄主的免疫反应,可以导致寄主植物感病或抗病。本研究将以稻瘟病菌的效应因子作为研究对象,筛选出具有抑制RNA沉默作用的效应因子并进行功能鉴定。主要研究成果如下:1、选取21个稻瘟菌效应因子基因,对这些效应因子基因进行PCR扩增并构建到pGDR载体上。2、通过基于16C烟草为材料的RNA沉默系统,从21个候选效应因子中筛选潜在RNA沉默抑制子,发现三个效应因子基因对基因沉默有抑制作用,但这一结果还需进一步的实验验证。3、通过激光共聚焦显微镜的观察,可以发现在水稻原生质体细胞中,其中两个效应因子基因出现不规则的定位,还有一个定位在细胞质膜上。4、为了验证效应因子所预测的信号肽是否与分泌作用有关,借助pSUC2的系统,验证得到PXX93-2以及PR16-1的信号肽与分泌作用有关。5、对PXX93-2以及PXX88-1这两个效应子基因成功进行了敲除并得以验证。本研究不仅为揭示效应因子基因在稻瘟菌侵染水稻过程中的功能提供新的理论依据,也可以深入了解RNA沉默机制及水稻与稻瘟菌的互作规律,有助于进一步有针对性的制定稻瘟病抗病策略。
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