葡萄酒与葡萄籽超微粉中赭曲霉毒素A提取及检测方法的研究

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赭曲霉毒素A(OTA)是曲霉属和青霉属的某些菌种产生的有毒代谢产物,具有肾脏毒性、肝脏毒性、免疫毒性、致畸和致癌性,国际癌症研究机构IARC已将其确定为2B类致癌物。OTA产生菌广泛地存在于自然界,多种食品受到OTA污染,已经引起世界各国及国际组织的极大关注。据报道,葡萄酒中含有OTA,一些相关性研究也表明葡萄皮渣中含有比酒中更多的OTA,这无疑增加了葡萄酒和葡萄籽超微粉的食用风险,因此研究葡萄酒与葡萄籽超微粉中OTA准确、灵敏、简便的检测方法对全面准确的评价二者的安全性,降低人群对OTA的暴露量具有重要的科学意义。本文比较了高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FD)和荧光光度法标准曲线的线性关系;对加速溶剂萃取法(ASE)提取葡萄酒中OTA的条件进行了选择;比较了溶剂萃取和ASE两种方法提取葡萄籽超微粉中OTA的效果,并优化了ASE萃取条件,主要试验结果如下:1.HPLC-FD法的标准曲线的线性关系良好,而且线性范围比较宽,是准确、灵敏的OTA定量方法。2.对ASE法提取葡萄酒中OTA的萃取溶剂、温度、循环次数进行选择后,没有得到较好的回收率,是因为ASE法净化效果不好以及浓缩过程有损失,所以该方法不适于提取葡萄酒中的OTA。3.以ASE和溶剂提取两种方法提取葡萄籽超微粉中的OTA,结合C18-SPE净化、HPLC-FD测定,结果表明,回收率:ASE法为124.5%,溶剂提取法为150.3%,变异系数:ASE法为7.77%;溶剂提取法为10.67%。ASE法有较高的精密度和较好的回收率,适合作为提取葡萄籽超微粉中OTA的方法。4.对ASE提取条件进一步优化,结果表明,ASE法最优提取条件为:溶剂甲醇、温度80℃、静态萃取时间3min、循环次数2次、萃取压力10.34MPa。通过对葡萄籽超微粉加标样品的精密度和准确度试验以及对自然霉变样品中OTA的测定,结果表明,用ASE提取—C18-SPE净化—HPLC-FD法测定葡萄籽超微粉中OTA的含量,可操作性强,加标回收率为74.7%~96.5%,变异系数为2.35%~4.96%,精密度较高、结果准确可靠,可作为分析葡萄籽超微粉中OTA的理想定量方法。
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