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目的:神经干细胞的研究近几年来是神经科学研究的热点,其体外的分离、纯化、培养已经日趋成熟,其替代治疗神经系统疾病正逐步走向临床应用当中,但就其具体的移植途径、移植时间窗等问题尚没有统一的规范,本实验通过对大鼠脑缺血MCAO模型进行神经干细胞移植治疗,对脑卒中患者针对细胞替代治疗的移植时间上、移植途径等问题上做进一步探讨,并印证细胞替代治疗的安全性及可靠性。方法:取8-12周胎儿,取其脑组织体外分离、纯化,采用EGF、bFGF及B27联合培养,原代培养经诱导、分化后,进行免疫荧光染色,对神经干细胞进行鉴定;选取280~320gSD大鼠,应用0.2cm尼龙线,采用线栓法制作MCAO大鼠模型,制作成功3周后,取鼠脑,明确梗死灶存在并进行HE染色;神经干细胞原代培养约20~25天后取生长活力良好的克隆球,于MCAO模型制作成功后第三周,对缺血半暗带进行多点注射进行细胞移植,每个位点注射5ul,移植前2天做BrdU标记,于移植后1周和4周分别做BrdU阳性检测。4周后进行行为学检测、神经功能评判并取鼠脑进行免疫组化分析。结果:从8-12周胎儿脑组织中成功分离、培养出神经干细胞,联合应用EGF、bFGF以及B27能够在体外稳定的培养、扩增神经干细胞,经Nestin染色阳性,分化10天后分别经NSE、GFAP、CNP染色呈阳性结果,证明培养细胞为神经干细胞;大鼠MCAO模型制作成功3周后,脑大体标本见明显软化灶形成、位置恒定,HE染色发现明显梗死灶;细胞移植四周后,实验组与对照组神经功能评分未见明显差异,可能与动物模型制作有关;行为学上,实验组与对照组的对侧前肢存在明显差异,实验组有明显的改善。移植后1周和4周,在移植位点均检测到BrdU阳性细胞,1周时BrdU阳性细胞局限在注射位点,4周时见BrdU阳性细胞出现向周边迁移,观察到的最远迁移距离为0.8mm。免疫组化发现移植的干细胞存在分化,大部分是胶质细胞,存在NSE阳性的神经元性细胞。结论:联合应用EGF、bFGF和B27可以从8~12个月胎儿脑组织中分离培养出神经干细胞;人胚神经干细胞可以在大鼠脑内存活、分化及整合,其迁移和分化表现出位点特异性,具有限制性的迁移和多分化潜能;行为学上表现出明显改善。