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目的:应用脊髓损伤模型打击装置制备大鼠脊髓损伤模型,在此基础上应用骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)对其进行治疗,观察大鼠损伤脊髓的修复情况,并通过BMSCs能向脊髓损伤处迁徙、抑制神经元凋亡并向神经元分化,来探讨其修复脊髓损伤的作用机制。研究方法:根据BMSCs的贴壁特性,体外分离纯化BMSCs。通过镜下观察BMSCs形态学变化、流式细胞仪检测细胞周期、MTT法检测其生长特性、流式细胞仪检测细胞表面标记鉴定所分离的BMSCs;采用自制打击设备,应用改良的Allen动物模型方法制备大鼠脊髓损伤模型;根据改良Tarlov行为功能评价标准,观察脊髓损伤模型大鼠运动功能恢复情况,并在光镜下观察比较经BMSCs治疗以及未经治疗大鼠的组织病理学变化;激光共聚焦显微镜下观察体外经DAPI标记的BMSCs通过大鼠尾静脉注入后是否向脊髓损伤区迁徙;使用免疫组织化学方法,观察经BMSCs治疗后,对损伤脊髓周围组织中Bcl-2, Bax及caspase-3表达的影响。用激光共聚焦显微镜观察在体外经BrdU标记的BMSCs通过静脉及局部注入后,BMSCs上神经元特异性蛋白NSE的表达情况。结果:1.大鼠BMSCs的分离、培养和鉴定:分离纯化的BMSCs呈均一的成纤维细胞样,细胞周期显示91.95%的P3代细胞处于G0-G1期,免疫组化结果为CD44阳性、CD34、CD45阴性,生长曲线证实BMSCs具有非常旺盛的增殖活性。2. BMSCs对脊髓损伤大鼠的治疗作用:根据改良Tarlov行为功能评分标准,术后15天,治疗组的运动功能评分较模型组显著增高。术后7、15、30天损伤区脊髓的病理切片显示:治疗组较空白对照组均有显著恢复:3. BMSCs向模型大鼠脊髓损伤区的迁徙激光共聚焦显微镜下观察发现,实验组于术后5天,在脊髓损伤组织血管内出现少量荧光标记的BMSCs,10天后有血管外弥散,15天后有广泛弥散。对照组于5天、10天及15天均未见DAPI标记的BMSCso4. BMSCs对神经元凋亡的抑制作用术后7天,治疗2组(BMSCs局部移植组)bax、caspase-3阳性细胞表达少于对照2组(单纯手术组)(P<0.05),治疗1组(BMSCs静脉移植组)Bcl-2阳性细胞表达多于对照2组(P<0.05);术后15天,治疗1组bax以及治疗2组caspase-3阳性细胞表达少于对照2组(P<0.05),治疗1组及治疗2组Bcl-2阳性细胞表达多于对照2组(P<0.05);移植后30天,治疗1组bax阳性细胞表达少于对照2组(P<0.05),治疗1组、治疗2组Bcl-2阳性细胞表达多于对照2组(P<0.05)。5、BMSCs上神经元特异性蛋白的表达情况:移植后15周,部分阳性标记的细胞出现神经元特异性蛋白,约15.1%表达神经元特异性蛋白NSE。结论:本实验体外成功分离纯化并扩增BMSCs;反复传代后仍能保持其原有的形态特点和分化能力;BMSCs经尾静脉及损伤局部注入后,可促进脊髓损伤大鼠运动功能的恢复,对大鼠脊髓损伤具有修复作用;BMSCs经尾静脉注入后,可向损伤组织迁徙;BMSCs可以通过抑制caspase-3, Bax表达、上调Bcl-2表达;BMSCs可向神经元分化,促进损伤脊髓的修复。本研究既丰富了BMSCs修复脊髓损伤的理论及实验数据,又为BMSCs应用于临床提供数据和理论依据。