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背景及目的:前期实验研究发现,miRNA156在甘草水提物miRNA中丰度较高,并经由细胞形态学、细胞增殖情况和免疫相关基因表达探索了甘草miRNA对人免疫细胞的影响。本研究从小鼠肠道菌群、淋巴细胞免疫基因表达、肠道组织转录组表达情况及肠道组织形态观察探究甘草及其miRNA对小鼠的影响,为拓展中药研究新方向奠定了基础。方法:1、制取甘草水提物及对照组金银花水提物,根据前期高通量测序结果中miRNA156序列,设计合成相应的miRNA156 mimic及相应的反转录及检测引物,分别通过灌胃不同剂量甘草水提物、miRNA156mimic及尾静脉注射miRNA156 mimic进行后续实验。眼球取血并离心获得小鼠血清,利用qRT-PCR检测血清中的miRNA。2、取小鼠新鲜粪便提取基因组DNA,进行16S rDNA V4V5高变区测序,分析各组间门纲目科属水平肠道菌群的差异,并通过α多样性及β多样性分析确定各组间关系及miRNA156在甘草中发挥的作用。3、取小鼠回肠片段,一部分液氮研磨提取RNA用于转录组测序并进行生物信息学分析,另外一部分样品用4%多聚甲醛溶液进行固定,HE染色,光学显微镜观测并保存照片,分析各组样品间的差异。4、取小鼠脾脏组织,用滤网研磨,破红处理获得淋巴细胞,提取总RNA,通过qRT-PCR检测各组间淋巴细胞中转录因子和细胞因子的表达差异。结果:1、通过动物实验获取小鼠血液、粪便、脾脏组织及回肠组织。通过qRT-PCR检测血清中miRNA,并未在血清中检测出与miRNA156阳性对照组相同的产物。2、16S rDNA V4V5高变区测序结果表明,小鼠体内的肠道微生物大部分由厚壁菌门,拟杆菌门和变形菌门等构成,与盐水对照组相比,伴随着甘草水提物浓度的增大,拟杆菌门和变形菌门丰度都相对发生下降,而厚壁菌门丰度明显增加;甘草miRNA对厚壁菌门影响不大,但是减少了拟杆菌门,增加了变形菌门,而发生变化的一些细菌已被证明与炎症或营养吸收有关。3、回肠样品转录组测序结果中,联系GO功能富集和KEGG通路分析找到了与免疫密切相关的表达差异基因,并进行了验证。通过观察各组回肠组织HE染色后的病理组织切片发现,除甘草低剂量组、miRNA尾静脉注射组和盐水对照组保持了完整的绒毛结构,高剂量的甘草水提物甚至导致了炎症,miRNA156 mimic通过灌胃对回肠产生了炎症作用。4、通过检测细胞因子、转录因子以及肠道转录组中个别有代表性差异基因在小鼠脾脏淋巴细胞内的表达发现,mBAX、mIL12p35、mNFκB1、mSTAT1、mTGF-β、mIFN-γ、mP53、mCd72、mCd79b、mCr2、mSell具有较显著表达差异。结论:结合前期的实验结果,甘草miRNA不仅对免疫细胞有显著的免疫调节作用,其对肠道菌群和肠道组织免疫系统都发挥着显著的调节作用,这对甘草药效作用机制研究领域具有深远的意义,对后期继续研究甘草临床应用、作用机制及新药研发带来新的研究思路。