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目的:探讨杆状病毒作为椎间盘退变基因治疗载体的可行性。方法:本研究从椎间盘发生退变的形态学变化,杆状病毒介导的标志基因GFP转染正常和退变兔椎间盘髓核细胞、介导治疗基因Sox9转染退变的兔椎间盘髓核细胞等方面进行了如下实验:⑴采用共聚焦显微镜和透射电镜,对幼年和成年兔椎间盘髓核组织、细胞以及基质的形态学进行了对比观察与研究。⑵取新西兰大白兔的腰椎间盘进行髓核细胞的分离与培养,分别以6种不同浓度的重组杆状病毒(Ac/CMV/GFP)转染细胞,用荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞的转染效率,并检测GFP基因的表达水平。分别将20μL Ac/CMV/GFP注入8只新西兰大白兔的L3-L4 L4-L5、L5-L6椎间盘髓核组织,并注射20μL生理盐水于L1-L2,而L2-L3不作任何处理进行自身对照。观察注射后兔的一般反应,分别于注射后的第7、13、20、28天各处死2只兔,进行髓核组织的切片观察。⑶取新西兰大白兔的髓核细胞进行离体培养,第一组:健康幼兔;第二组:椎间盘退变模型兔;第三组:椎间盘发生自然退变的成年兔。以200MOI的Ac/CMV/GFP转染离体培养的细胞,于第48小时采用流式细胞仪检测转染效率,同时采用HPIAS2000图像分析软件半定量分析外源性GFP基因的表达水平。⑷采用BAC-to-BAC系统构建重组杆状病毒Ac/CMV/Sox9,(Sox9是公认的能够延缓和逆转椎间盘退变的治疗基因),用它转染离体培养的正常兔椎间盘髓核细胞,并设立Ac/CMV/GFP转染组和空白组作为对照,免疫组化的方法检测Sox9基因在细胞中的表