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甲型流感病毒常引起人和动物感染，H5N1亚型禽流感病毒为高致病性禽流感病毒。1997年，香港出现首个人感染H5N1亚型禽流感病毒并引起死亡的病例，高致病性H5N1亚型禽流感对人类健康和财产造成了巨大损失，在流感疫情发生初期，建立一种准确、快速、便捷、高效的检测方法，对于及时防控疫情的发展具有重要意义。流感病毒核蛋白（nuclear protein，NP）保守性较高，为流感分型和鉴定的基础。据报道NP蛋白可在原核和真核系统中进行表达，但各有优缺点。胶体金侧向免疫层析试纸条（lateral flow immunochromatographic strip，LFICS）是目前应用最广泛的一种即时检验（point-of-care testing，POCT）检测方式，具有成本低、检测时间短、适用于野外诊断等优点，可用于流感病毒的早期诊断及检测体内流感抗体产生情况。 本研究分别利用大肠杆菌原核表达系统、昆虫杆状病毒真核表达系统分别表达H5N1 A/meerkat/Shanghai/SH-1/2012 (clade 2.3.2.1) NP蛋白，分别构建含有NP基因的重组载体，转化或转染E.coli或Sf9细胞，进行大规模培养和表达，应用间接免疫荧光、ELISA、SDS-PAGE、WB等方法对表达的NP蛋白进行鉴定。利用两个系统均能成功表达目的蛋白，但真核昆虫杆状病毒表达系统表达的NP蛋白和抗体具有较高的结合活性，利用此NP蛋白作为标记抗原，用竞争法和双抗原夹心法建立胶体金侧向免疫层析试纸条，根据特异性和灵敏性分析，昆虫杆状病毒表达系统表达的NP蛋白更适合用双抗原夹心法进行胶体金侧向免疫层析试纸条的制备。利用此胶体金侧向免疫层析试纸条检测不同亚型流感病原血清，监测不同亚型的流感病毒感染后或疫苗免疫后体内抗体产生。 我们的研究结果表明，E.coli原核表达系统和昆虫杆状病毒真核表达系统均能够表达NP蛋白，成功利用真核表达系统表达的NP蛋白以双抗原夹心法建立胶体金侧向免疫层析试纸条，实现对流感病毒感染的监测及疫苗免疫效果评价，为防控流感病毒感染提供帮助。