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过量饮酒会引起广泛的肝脏疾病,如脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化和肝癌。特别是酒精性肝病(alcoholic live disease,ALD),已引起广泛关注。本文以来源于海马的两种多肽为实验原料,考察了两种海马多肽的活性,研究了SHP-1(VSIADSKA,Val-Ser-Ile-Ala-Asp-Ser-Lys-Ala)和SHP-2(ENANGP,Glu-Asn-Ala-Asn-Gly-Pro)对人肝癌细胞(HepG2)酒精性损伤的保护作用及其机制,为海马多肽在ALD的预防和治疗中提供了理论基础。主要研究内容及结果如下:1、采用MTT实验测定细胞活力。实验结果表明,酒精的最佳作用浓度为0.75 M;在10-100μM浓度范围内,两种多肽对细胞均无毒害作用;与酒精损伤组(对照组)相比,在10-100μM时,细胞相对活力明显增强,且呈浓度依赖性。这说明两种海马多肽对酒精诱导的HepG2细胞损伤均具有保护作用。2、采用DCFH-DA法检测细胞内ROS的含量。实验结果表明,与对照组相比,两种海马多肽都减少了细胞内ROS的含量,即海马多肽可有效抑制ROS的生成。3、采用SOD、GSH和GGT检测试剂盒检测细胞内SOD、GSH和GGT的含量,并利用western blot检测SOD、GSH和GGT的表达情况。实验结果表明,与对照组相比,海马多肽能够有效恢复细胞内SOD和GSH活力,使GGT含量减少;使细胞内SOD和GSH表达明显增加,而GGT表达减少。4、采用western blot检测与细胞凋亡相关的蛋白表达情况。实验结果表明,与对照组相比,样品组的bax、c-caspase-8/9-3的表达均明显降低;而bcl-2水平上调,即海马多肽可抑制HepG2细胞凋亡。5、采用western blot检测两种海马多肽对Akt和NF-κB信号通路的影响。实验结果表明,与对照组相比,p-Akt、p-IkB-α和p-p65的表达均明显下调,即海马多肽对Akt和NF-κB信号通路有抑制作用。6、采用免疫荧光法检测p65蛋白入核情况。实验结果表明,与对照组相比,两种海马多肽均能明显抑制p65蛋白从细胞质进入细胞核。7、采用western blot检测两种海马多肽对MAPK信号通路的影响。实验结果表明,与对照组相比,p-ERK和p-p38的表达明显降低,即两种海马多肽都对MAPK信号通路有抑制效果。8、采用JC-1染色法检测线粒体膜电位的变化情况。实验结果表明,与对照组相比,两种海马多肽均可使线粒体膜电位升高。9、采用单细胞凝胶电泳实验(彗星实验)检测DNA损伤情况。实验结果表明,与对照组相比,两种海马多肽都能够有效降低DNA损伤情况。10、采用ELISA检测TNF-α的含量变化。实验结果表明,与对照组相比,两种海马多肽均可降低细胞内TNF-α的含量。综上所述,两种海马多肽均可保护由酒精引起的HepG2细胞损伤。其作用机制可能是通过抑制ROS的生成,增加SOD和GSH的含量,抑制促凋亡蛋白bax的表达,促进抑凋亡蛋白bcl-2的表达,抑制caspase-8/-9/-3的活化,抑制Akt、NF-κB和MAPK信号通路,提高线粒体膜电位和降低细胞内TNF-α含量来保护细胞免受氧化应激损伤。