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辽宁绒山羊是我国绒产量极高的特有品种,其绒毛更有“软黄金”的美誉。辽宁绒山羊的绒毛生长受到环境、代谢、基因等多种因素的影响。近些年来,越来越多的学者开始致力于研究如何提高辽宁绒山羊的绒毛产量及质量。但目前,对于各种因素调节辽宁绒山羊绒毛生长的作用机制研究的少之又少。本实验室前期研究表明,0.2 g/L褪黑激素处理辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞72 H后,细胞中同绒毛生长有关的差异表达基因最多,其中IL-6和TNF-α两种基因的表达量显著增加。IL-6和TNF-α两种基因可参与伤口愈合及绒毛生长过程。另外,IL-6和TNF-α两种基因可参与调节绒毛生长相关的NF-κB和TNF信号通路。因此,本实验的目的是将IL-6和TNF-α两种基因与辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞相关联,探究IL-6和TNF-α两种基因对辽宁绒山羊绒皮肤成纤维细胞增殖情况的影响,在分子和细胞水平探究褪黑激素调节绒毛生长的作用机制,进而为进一步提高羊绒的生产量及其品质提供数据支持。实验操作过程中,首先通过生物信息学分析,对IL-6和TNF-α两种基因编码的蛋白质进行理化性质分析、糖基化及磷酸化位点分析、跨膜结构域及信号肽预测、结构预测等;然后通过CCK-8实验探究0.2 g/L褪黑激素对辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞增殖的影响;接下来,利用基因过表达、CCK-8等实验探究过表达IL-6和TNF-α两种基因对辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞增殖的影响;最后通过基因干扰、QPCR和CCK-8等实验探究干扰IL-6和TNF-α两种基因对辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞增殖的影响。实验结果表明0.2 g/L的褪黑激素处理辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞24至48小时区间内有利于该细胞增殖,处理时间在48至72小时区间内抑制该种细胞增殖。无论过表达IL-6和TNF-α两种基因,还是干扰两种基因的表达,对辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞增殖均无显著影响。但干扰IL-6和TNF-α两种基因的表达后,外加褪黑激素的四个处理组中,细胞活力整体呈上升趋势。因此我们认为,在自然情况下IL-6和TNF-α两种基因对辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞的增殖没有影响,但是IL-6和TNF-α两种基因对辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞在褪黑激素处理的条件下具有保护作用。