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目的:1.探讨建立稳定的大鼠肝移植动物模型的方法和手术技巧,为进一步的实验提供能够长期存活的稳定的肝移植动物模型。2.研究同种同基因肝移植(syngenic liver transplantation)和同种异基因肝移植(allogenic liver transplantation)后大鼠肝脏急性排斥反应(acute rejection, AR)病理表现、肝功能变化和肝脏组织内肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration, ALR)与INF-γ、IL-2表达变化的关系,从而探讨ALR与大鼠肝脏移植后急性排斥反应的相关性。方法:1.采用Kamada“二袖套法”,稍加改进建立大鼠原位肝移植动物模型,即采用端端连续缝合法吻合肝上下腔静脉,用双袖套法吻合门静脉及肝下下腔静脉,肝动脉结扎不予重建,胆管用内支架法完成胆道重建。术后观察大鼠存活率和生存质量,总结手术技巧、经验和方法,掌握成熟稳定的大鼠原位肝移植动物模型手术技术。2.采用上述方法建立Lewis(LEW, Rt11)→Brown Norway(BN, Rt1n)和BN→BN大鼠同种异基因肝移植(A组)和同种同基因肝移植(B组)动物模型。每组正常存活大鼠12只,于1、3、5、7天分别活杀3只取外周血浆及肝脏组织标本。光镜观察肝脏组织形态学改变;全自动生化分析仪检测外周血血浆ALT、AST和TBIL;免疫组织化学、Real time-PCR检测ALR、INF-γ和IL-2蛋白和基因的表达。结果:1.经过反复的练习,采用改良的Kamada“二袖套法”能够成功的建立稳定的大鼠原位肝移植动物模型,术后7天生存率达到90%以上。并且在后续的试验中我们成功的建立了从LEW→BN大鼠肝移植急性排斥反应动物模型,从术后3天开始出现急性排斥反应病理表现(Banff标准),第5、7天最为典型。而BN→BN大鼠肝移植后相同时相点肝脏组织未见明显的急性排斥反应病理表现。2.术后第1天两组肝脏组织病理损伤程度相似,同种异基因移植组肝功能变化与同种同基因移植组无统计学差异;ALR(1.13±0.10 v.s 1.09±0.12)与IL-2(0.315±0.088 v.s 0.279±0.048)两组比较数据均无明显统计学差异,P>0.05。而同种异基因移植组INF-γ(0.052±0.009)明显高于同种同基因移植组(0.007±0.003),P<0.05。第3、5、7天两组大鼠肝脏组织病理变化及肝功能损伤均逐渐加重,同种异基因移植组INF-γ(0.477±0.117, 0.162±0.021, 0.122±0.014)和IL-2(2.718±0.479, 3.330±0.562, 3.506±0.367)表达较同种同基因移植组INF-γ(0.014±0.004, 0.012±0.004, 0.016±0.003)及IL-2(0.296±0.057, 0.320±0.027, 0.286±0.048)明显升高,P<0.05。但ALR的表达在同种同基因移植组(0.81±0.11, 2.86±0.37, 3.19±0.35)明显高于同种异基因移植组(0.59±0.10, 1.57±0.27, 1.98±0.13),P<0.05。同种异基因移植组ALR mRNA升高的同时,该组肝脏组织内INF-γmRNA表达进行性下降,但IL-2 mRNA却缓慢升高。同种同基因组未见相似的变化趋势。3.本实验首次通过体内研究发现肝移植急性排斥过程中ALR和免疫调节细胞因子INF-γ的表达呈明显的负性相关(r=-0.86, P<0.05),而ALR和IL-2的表达无相关性(r=0.322, P>0.05)。结论:1.采用改进的Kamada“二袖套法”可以简化手术术式,成功的建立稳定的大鼠原位肝移植动物模型。2.LEW→BN大鼠的肝移植组合方式,可以建立典型的急性排斥反应模型。3.ALR可能通过抑制免疫效应细胞表达INF-γ参与肝移植急性排斥反应的调节。