灰树花是一种具有独特的营养和医疗价值的食药两用真菌,它具有抗肿瘤、抗病毒、降低血压等作用,且无毒副作用.该文系统地研究了碳源、氮源、无机盐、维生素以及种龄、接种量、摇床转速、摇瓶装液量和培养基pH值等因素对灰树花液体深层发酵菌丝体产量的影响,并通过均匀设计法优化了发酵培养基配方.同时测定了菌丝体有效成分,并与栽培灰树花子实体进行比较.实验结果表明玉米粉、葡萄糖为最佳碳源,豆饼粉为最佳氮源,KH2P04、MgS04以及少量VB1的添加均使菌丝体产量明显增加.4.6％玉米粉、3.5％豆饼粉、0.1％葡萄糖、0.32％KH2P04、0.01％MgS04、少量VB1的培养基配方可使菌丝体产量达到最大.而且深层培养生产所得菌丝体不仅在产量、生产周期等方面优于传统培养方法,而且在营养成分方面接近或超过栽培的灰树花子实体.我们应用原生质体紫外诱变技术,对灰树花菌株Gr1进行了紫外诱变处理.经过粗筛和精筛后,从中选出两株多糖含量和产量明显优于原始菌株的突变株.经过6代PDA斜面继代培养及其摇瓶试验,表明所得突变株是比原始菌株更优秀的稳定高产、高多糖含量的新菌株.海藻糖是一种稳定的非还原性双糖,在食品、保健、生物制品、精细化工等领域中有很广阔的应用前景,而且有很大的市场需求量.目前获得海藻糖的方法主要是生物提取的方法,成本较高.在担子菌灰树花中,海藻糖的干重最高达到15-17％左右,这说明灰树花合成海藻糖的能力很强.我们克隆了灰树花海灌糖合成酶基因和大肠杆菌蔗糖磷酸化酶基因,分别构建了大肠杆菌和毕赤酵母表达载体,而且在大肠杆菌表达系统和毕赤酵母表达系统里表达了这两种酶.采用上述这两种酶,可以利用蔗糖和葡萄糖为原料合成海藻糖.我们在大肠杆菌中利用PBV220载体表达了海藻糖合成酶基因和蔗糖磷酸化酶基因,表达量分别为190毫克/升和250毫克/升左右.在毕赤酵母中利用pPICZα载体表达了海藻糖合成酶基因和蔗糖磷酸化酶基因,表达量分别为180毫克/升和120毫克/升左右.在以蔗糖和葡萄糖为主要成分的反应液中,分别加入适量的经过表达和纯化的上述两种酶,经37℃反应24小时后,通过纸层析定性分析,在反应液中检测到了海藻糖的存在.证明在大肠杆菌和酵母中表达的海藻糖合成酶和蔗糖磷酸化酶都具有酶活性.该研究结合基因工程和酶工程方法,为合成海藻糖的研究提供了新的思路.