论文部分内容阅读
目的:本论文通过研究OTUB1基因在膀胱癌发生及发展过程中的作用,从而进一步阐明OTUB1基因与人类肿瘤的关系。方法:1、检测OTUB1基因在膀胱癌肿瘤组织及癌旁组织中含量的高低及其表达差异。首先通过实时定量PCR技术检测OTUB1基因在膀胱肿瘤组织及癌旁组织的含量差异,然后通过免疫组化技术研究探究膀胱癌组织与癌旁组织中OTUB1的表达差异。2、探究OTUB1基因对膀胱癌肿瘤细胞行为学方面的影响:分别构建OTUB1基因过表达质粒和干扰质粒,并稳定转染膀胱癌肿瘤细胞株,通过western blot验证OTUB1基因在上述细胞株中的表达高低;然后采用CCK-8法检测OTUBl基因过表达、干扰细胞与对照组细胞增殖能力的差异,并采用Transwell小室来探究其迁移能力差异,采用Matrigel胶穿实验来探究不同稳定转染细胞株侵袭能力的差异。结果:1、测定膀胱癌肿瘤组织与其配对的癌旁组织中OTUB1m RNA的表达量,发现癌变组织中的OTUB1m RNA的表达量较癌旁组织要高4.37倍(P<0.05)。通过免疫组织化学技术分析,与其相应的癌旁组织相比,OTUB1基因在膀胱癌癌变组织中的蛋白表达量显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05);OTUB1基因的蛋白表达水平与淋巴结转移与否、肿瘤的大小及肿瘤的病理分级密切相关,且差异显著(P<0.05)。2、OTUB1基因的过表达可引起膀胱癌肿瘤细胞的增殖,细胞迁移和侵袭能力的增强。而OTUB1基因被干扰时,可引起膀胱癌肿瘤细胞在体外的增殖、迁移及侵袭能力的减弱。本研究首次从细胞行为学的角度,研究OTUB1基因对膀胱癌肿瘤细胞生物学行为的影响,构建了OTUB1基因过表达与干扰的膀胱癌肿瘤细胞系,探讨肿瘤的增殖能力,侵袭能力,迁移能力与OTUB1表达情况的相关性,为进一步研究OTUB1基因及其表达产物在与肿瘤发生发展相关的信号通路上所发挥的作用,奠定了坚实的基础。本研究旨在寻找一种膀胱癌早期诊断的新的潜在标志物,对患者的病灶大小,淋巴结转移与否等临床情况进行预判,同时寻找一种潜在的膀胱癌生物学治疗靶点。结论:在膀胱癌肿瘤组织中,OTUB1的m RNA与蛋白水平均呈现高表达特点;OTUB1基因具有促进肿瘤组织细胞的增殖、迁移与侵袭的能力。OTUB1在膀胱癌的发生、发展与转移过程中发挥了十分重要的正性作用。