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背景临床AML中的CR主要是指化疗后骨髓功能和外周血细胞计数的恢复。所谓细胞形态学的CR患者,有可能在其骨髓中携带多达1010个白血病细胞。关于AML的MRD检测,技术方法较多,对于这种敏感检测没有单一的标准技术。用于过表达基因或特征性染色体易位,荧光原位杂交(FISH)和多参数流式细胞术,以及实时定量PCR(qPCR)都是可行的检测策略。无论采用何种MRD的检测方法,目前普遍认为细胞形态学CR的MRD阳性(MRD+),预示着复发的风险性更高。同样,如果HSCT前检出MRD的患者,其移植后复发的风险会更高。近年来,随着免疫学及分子生物学实验技术的发展,MRD检测的灵敏度和特异度均有很大提高,其临床应用价值也逐渐得到肯定。干细胞中特定的起始突变驱动增强的克隆优势和白血病潜力,而随后的联合突变驱动进展和转型,并构成了基础的遗传框架。遗传特征已经被纳入AML预后的经典模型,分子遗传评估也成为白血病临床检测的常规部分。具体来说就是,AML遗传因素的检测可以指导临床缓解后的治疗策略。尤其是许多研究都表明MRD检测可以进行白血病预后的风险评估。目前风险评估的相关因素主要包括细胞遗传学、表观遗传学和基因突变检测。细胞遗传学异常分类是白血病风险判断的重要依据。急性早幼粒细胞白血病(APL)是临床上最凶险的一类非淋巴细胞白血病,由于诱导分化剂全反式维甲酸和三氧化二砷的应用,APL完全缓解率已达到80%以上。但白血病复发一直是困扰临床进行缓解后巩固、维持治疗及影响患者总生存期的主要障碍,而复发的根源主要是来自体内残留的白血病细胞,即急性白血病微小残留病(MRD)[1,2]。染色体t(15;17)(q22;q21)易位,形成PML-RARα融合基因是APL的特异性标志,阳性率约占98%[3,4]。检测融合基因产物,了解白血病细胞在治疗中的消减情况对监测MRD具有重要意义。目前检查微小残留病融合基因主要通过PCR或实时荧光定量PCR[5,6]。PCR耗时长、灵敏度和特异性低、仪器要求高。实时荧光定量PCR方法虽然特异性和灵敏度有所提高,但是需要产生荧光的引物和探针,还需要昂贵的检测设备,而且需要2-3个小时。为了解决以往白血病微小残留病检测中易出现假阳性、检测成本高、操作复杂、检测时间长的问题,我们建立了用环介导等温扩增LAMP方法检测PML-RARα基因。实现了基因扩增和结果判定一步完成,操作简单、结果准确直观、特异性与敏感性高、对人体安全、不污染环境,适合于各级医院快速诊断白血病微小残留病,排除了基层医院难以开展此类检查的障碍。目的建立环介导等温扩增LAMP检测PML-RARα融合基因的方法,进行APL患者微小残留病的快速检测。方法登录NCBI在线软件设计多组LAMP引物,并设计验证阶段所需的PCR引物。根据反应时间及特异性对不同LAMP引物组的反应进程和结果进行检测、筛选。根据同一核酸序列设计PCR引物,用于检测基因表达情况,根据反应液的颜色变化裸眼观察,判断扩增结果。同时,将外引物F3、B3作为PCR引物,用于LAMP方法和PCR方法的比较,分析LAMP方法的特异性和敏感性。结果通过LAMP法检测PML-RARα融合基因,所需时间缩短,可直接裸眼观察反应液颜色的变化判断扩增结果,LAMP法检测下限低于PCR方法的检测下限;选择临床样本进行LAMP与筑巢式PCR检测,两种方法的检测结果无明显差异,具有较高的吻合性。结论1、LAMP法操作简便,只需把样本(含有靶基因)与调配好的试剂混合,在65℃保温1小时就可以检测扩增产物或者判定扩增反应发生与否。2、LAMP法不需要改变温度,只需把试剂都加入反应试管中,包括变性步骤的全过程能在等温条件下短时间内完成,可以检测扩增产物或者判定扩增反应发生与否。3、LAMP检测PML-RARα融合基因的方法,方便、简单,实现一步法快速检测,LAMP法是简便、快速的基因扩增法。并且LAMP法通过4种引物识别6个区段,只针对靶基因进行扩增,是准确的基因扩增法。4、由于LAMP法不需要特殊试剂,成为能够有效控制成本的基因检测手段。LAMP法是简便的基因检测法,可进行实时检测。5、使用了环引物后,扩增时间更可缩短为原来的1/2到1/3。6、LAMP检测PML-RARα融合基因的方法,具有较高的特异性、敏感性和临床吻合性。