论文部分内容阅读
目的:探讨调控Toll样受体4/核转录因子-κB信号通路对大鼠呼吸机相关性肺损伤的影响。方法:将24只SD大鼠随机分成NTV组、Sal-HTV组、Ab-HTV组,每组8只。大鼠气管插管后经气管导管快速间断注射同等体积的生理盐水(NTV组,Sal-HTV组),抗大鼠TLR4单克隆抗体(Ab-HTV组)。NTV组(VT=10ml/kg), Sal-HTV组(VT=40ml/kg)和Ab-HTV组(VT=40ml/kg)接上动物呼吸机机械通气4h。自大潮气量(40ml/kg)通气处理4h大鼠的支气管肺泡灌洗液中提取肺泡巨噬细胞并分成PBS组、TNF组、TNF+Ab组(使用抗大鼠TLR4单克隆抗体预处理),每组8瓶细胞(约4×106个)。其中TNF组和TNF+Ab组使用肿瘤坏死因子-α刺激16h, PBS组使用同体积PBS处理。应用肺组织病理鉴定,干湿比重,细胞计数和支气管肺泡灌洗液及外周血的炎性因子水平评估肺损伤程度。应用RT-PCR和Western-blot检测巨噬细胞中的TLR4,TLR9,MyD88和NF-κB的基因和蛋白表达水平。结果:与正常潮气量通气的大鼠相比,大潮气量通气处理的大鼠肺通透性、肺水肿程度、炎性浸润程度、支气管肺泡灌洗液及外周血中的IL-1β、 IL-6和肿瘤坏死因子-α表达水平、巨噬细胞中的TLR4,TLR9,MyD88和NF-κB的基因和蛋白表达水平均明显升高。但经抗大鼠TLR4单克隆抗体预处理的大鼠表现出更轻的肺损伤程度:肺组织炎性浸润程度、肺水肿程度、细胞计数和支气管肺泡灌洗液及外周血中的IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α表达水平均明显减少。相似的,与TNF组相比,TNF+Ab组中培养上清的炎性因子水平和巨噬细胞中的TLR4, TLR9, MyD88, NF-κB的基因和蛋白表达水平明显减少。结论:TLR4通过介导MyD88/NF-κB信号通路引起呼吸机相关性肺损伤;抗TLR4单克隆抗体预处理参与抑制MyD88/NF-KB信号通路并减轻肺损伤。